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yanyuyu新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助，PCR的電泳結(jié)果出了未知問題
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這是我電泳的條帶，應該在700BP和550BP出目的帶，結(jié)果在最下面有很嚴重的拖尾，目的條帶看不出來，請問各位大俠是什么原因？ |
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2樓2011-05-19 11:01:25
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3樓2011-05-19 11:55:58
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西瓜(金幣+2): 反饋很積極，要鼓勵的，呵呵~下次把問題的補充放在1樓吧，點擊下方的“編輯”就可以了。 2011-05-19 16:25:33
西瓜(金幣+2): 反饋很積極，要鼓勵的，呵呵~下次把問題的補充放在1樓吧，點擊下方的“編輯”就可以了。 2011-05-19 16:25:33
謝謝大家的熱心，心里很溫暖 這個本身就是退火溫度的PCR，從左到右分別是55，57，61，63和65度。 反映體系是：ddH2O 17.5μL 10×Taq reaction buffer 2.5μL dNTP（2.5mM） 1μL P1（10μM） 1μL P2（10μM） 1μL 基因組DNA 1μL Taq DNA polymerase（2.5U/μL） 1μL Total Vol. 25μL 55的在1000Bp左右有個微弱的帶。。。 大家看這個體系有問題嗎？ |
8樓2011-05-19 14:18:13
lly198784
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9樓2011-05-19 14:19:06
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+4): 歡迎新蟲交流！ 2011-05-23 00:55:12
yanyuyu(金幣+2): 謝謝你，我這個圖本身就是梯度的PCR，有做了幾次好了些，準備加大循環(huán)次數(shù) 2011-05-23 14:01:34
西瓜(金幣+4): 歡迎新蟲交流！ 2011-05-23 00:55:12
yanyuyu(金幣+2): 謝謝你，我這個圖本身就是梯度的PCR，有做了幾次好了些，準備加大循環(huán)次數(shù) 2011-05-23 14:01:34
| 個人感覺：模板有些問題，樓主說是基因組DNA模板多大量（不是體積），前端不太像引物二聚體！估計PCR體系應該不會有問題吧。。體系出問題也就是特異性可能會有所差異。�？倯撚袔Р攀�！按照你退火溫度55時有1000bp的帶而溫度升高后同樣位置沒有條帶估計是引物沒有結(jié)合上。。引物的特異性也有些問題。�；蛘吣０辶刻�。。建議做個NESTING PCR。。如果討厭設(shè)計兩套引物的話，最快的方法用你55度的PCR產(chǎn)物當模板。。再用你的引物P一次或者干脆加大循環(huán)數(shù)。。�？茨懿荒艹鰜�。。目的帶。。如果出來了再優(yōu)化優(yōu)化條件。。 |
10樓2011-05-21 15:26:40
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