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[交流]
細胞問題
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有誰知道細胞的固定方法還有哪些?(除了用適體固定和用玻璃固定)最好附上方法或文獻! 還有誰知道BGC細胞是貼壁細胞嗎?如果用緩沖液洗的話會不會被沖掉? |
【分子生物】EPI帖 |
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培養(yǎng)細胞常用固定劑有4%多聚甲醛磷酸緩沖液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃預熱的PBS輕洗細胞。 1.4%多聚甲醛磷酸緩沖液 固定10—20分鐘,干燥。 2.甲醇 10‰甲醇固定5—20分鐘,自然干燥。 3.丙酮 4℃冷丙酮固定組織穿透性和脫水性強,抗原保存好,很少用于組織切片,常用于培養(yǎng)細胞和細胞涂片的固定,平時丙酮4℃低溫保存?zhèn)溆,臨用時,將載玻片插入冷丙酮內5~10分鐘,取出后自然于燥。 4.乙醇 95%乙醇脫水性強,易引起組織收縮、變硬,影響切片質量,因而固定時間不宜過長(2小時內)。乙醇使蛋白變性程度輕,固定后蛋白可再溶解,在染色中孵育時間長的情況下,抗原可流失,并減弱反應強度。 5.乙醚(或三氯甲烷) 與乙醇等量混合對組織穿透性極強,即使涂片上含較多的黏液,固定效果仍較好,是理想的細胞固定液。 培養(yǎng)細胞固定之后晾干可使細胞牢固地黏附在載玻片上,故對于容易脫落的細胞應延長晾干時間。晾干之后PBS漂洗3次,然后進行組織化學或免疫組織化學染色。 用于免疫組織化學的固定劑種類很多,不同的抗原和標本均可首選醛類固定液,如效果不佳,再試用其他固定液。選擇最佳固定液的標準:一是能最好地保持組織細胞的形態(tài)結構;二是最大限度地保存抗原免疫活性和被檢物不被丟失。 |
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