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margersy113新蟲 (正式寫手)
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[求助]
HPLC 檢測樣品出峰問題，怎么解決才好？？
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分不開的峰！ 本人現(xiàn)在在用HPLC-ECD檢測6-OHDA。 文獻流動相是：25mM檸檬酸，125mM磷酸鈉（文獻中寫的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5。 在我的實際操作中，先后試過pH=3.0, 3.5, 3.8, 4.1。出峰時間基本在4-6分之間（其中pH3.8出峰時間相對最好，在5-6分之間，而且出峰時間隨著時間的進行一點一點往后移，這也是我很糾結(jié)的地方，懷疑是我操作問題，但找不到原因），但是我們測實際腦樣品時，出現(xiàn)了一個大峰，時間從2分持續(xù)到5分（有拖尾現(xiàn)象），這樣就影響到了6-OHDA，我們無法判斷到底是不是6-OHDA。 后來我改了流動相：125mM檸檬酸（原來是25mM），125mM磷酸鈉（文獻中寫的是sodium phosphate），100mg/lEDTA，30mg/lSOS，配置好后用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5。我檢測了只有6-OHDA的樣品，很奇怪，在 4-5分出了一個峰，11-12分出了一個峰，4針都是這樣。然后我進了添加了6-ohda的腦樣本，之前說的大峰倒是沒有了，但是變成一個一個小峰（2-6分之間），而且11-12分的6-OHDA也沒有出現(xiàn)，還是無法判斷6-OHDA. 我很迷茫現(xiàn)在，我不知道我應(yīng)該如何改進方法。 請各位大俠幫忙 |
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margersy113
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