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diduqiong木蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助：關(guān)于重組質(zhì)粒目的條帶丟失
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| 提質(zhì)粒酶切，做好的重組質(zhì)粒有時(shí)候提得到含目的條帶的有時(shí)候提出來(lái)酶切不開(kāi)，電泳看看跟空載質(zhì)粒一樣大，都是從同一個(gè)劃線(xiàn)平板上接的菌，這是為什么啊，跟培養(yǎng)時(shí)間有關(guān)系嗎？難道培養(yǎng)的時(shí)間長(zhǎng)了會(huì)把目的條帶丟失嗎？有木有童鞋跟我有一樣的經(jīng)歷啊? |
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2樓2011-05-31 10:53:47
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
dhd997(金幣+3, EPI+1): 2011-05-31 12:45:43
diduqiong(金幣+3): 2011-05-31 12:51:41
dhd997(金幣+3, EPI+1): 2011-05-31 12:45:43
diduqiong(金幣+3): 2011-05-31 12:51:41
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1:你確定你的目的條帶連接上了嗎？還是已經(jīng)驗(yàn)證連接上了，然后提質(zhì)粒覺(jué)得不對(duì)。 2：一般你的目的條帶如果過(guò)于小的話(huà)，連到載體上，跑出來(lái)的電泳結(jié)果是和空載體一樣大的，然后單酶切或者雙酶切就可以看出來(lái)你連接的目的片段了。 3：建議你用你提的質(zhì)粒當(dāng)模板做個(gè)PCR看看有沒(méi)有條帶。 |
3樓2011-05-31 12:07:08
diduqiong
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
diduqiong(金幣+1): 謝謝！做個(gè)PCR試試 2011-05-31 15:53:08
dhd997(金幣+3): 歡迎交流 2011-06-01 08:33:25
diduqiong(金幣+1): 謝謝！做個(gè)PCR試試 2011-05-31 15:53:08
dhd997(金幣+3): 歡迎交流 2011-06-01 08:33:25
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我覺(jué)得您說(shuō)的并不清楚； 既然是和空載一樣，那么是沒(méi)有克隆成功，這是必然的； 如果，說(shuō)培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，片段丟失，那是不可能的； 如果，你認(rèn)為成功了，你隨便切一個(gè)位點(diǎn)即可，和空載體比較分子量即可；或者PCR鑒定；或者測(cè)序；或者你的酶切位點(diǎn)對(duì)甲基化敏感。 希望對(duì)你有幫助 |
5樓2011-05-31 14:42:43
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6樓2011-05-31 15:54:34
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7樓2011-05-31 16:02:27
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9樓2011-06-01 00:39:30
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