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changeng新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求葉綠素合成中間產(chǎn)物ALA的測(cè)定方法，最后是做過的。
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【答案】應(yīng)助回帖
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xiaohouo0(金幣+5, APEPI+1): 感謝積極應(yīng)助，很詳細(xì)！ 2011-08-17 14:28:47
xiaohouo0(金幣+5, APEPI+1): 感謝積極應(yīng)助，很詳細(xì)！ 2011-08-17 14:28:47
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我剛好前一陣子測(cè)了葉綠素的一系列前體物質(zhì)，當(dāng)然包括ALA。 δ-氨基乙酰丙酸ALA的測(cè)定： 1）取新鮮水稻葉片5克，用5ml 4%的三氯乙酸（w/v）及少量石英砂研磨三次，合并上清液并定容至20ml。（此步驟也可在液氮中研磨然后加入三氯乙酸）。 2）18000g離心15分鐘。 3）取5ml上清液加入2.35ml醋酸鈉（1mol/L）和0.15ml乙酰丙酮。沸水浴10分鐘后冷卻至室溫。 4）取其中的2ml加入2ml顯色液（Ehrlich-Hg試劑）黑暗下15分鐘后測(cè)553nm的OD值。 這是測(cè)定ALA的相對(duì)含量，最后如果要定量的話可以用A553/A525l來代表其含量。 Ehrlich-Hg試劑：1g P-二甲氨基苯甲醛溶解于30mL冰醋酸中，加入8mL70%的高氯酸（高氯酸遇有機(jī)溶劑易爆炸），用冰醋酸稀釋到50mL，最后加入0.2g升汞。此溶液存于棕色瓶中，外面用錫紙包裹，可以在4℃長(zhǎng)期保存。 |
2樓2011-08-16 19:42:46
lixiang2012
銅蟲 (初入文壇)
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3樓2012-11-19 14:26:24
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