 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3183 | 回復(fù): 15 | ||
| 本帖產(chǎn)生 2 個(gè) MicEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
30937747木蟲 (小有名氣)
|
[求助]
[求助]高保真酶擴(kuò)不出來
|
|
| 我提取RNA做反轉(zhuǎn)錄得到cDNA,以cDNA為模板做PCR,用普通taq酶擴(kuò)出來的片段很亮,而且專一性很好,但是換高保真酶都擴(kuò)不出來,換了兩種酶,溫度梯度和濃度梯度都做了,延伸的時(shí)間也增長(zhǎng)了一倍.但是就是沒有結(jié)果,請(qǐng)問有什么好的建議嗎? |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
0703化學(xué)336分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有13人回復(fù)
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專碩306英一數(shù)二
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
302求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
26博士申請(qǐng)
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 高保真酶PCR
已經(jīng)有6人回復(fù)
- puf酶與普通Taq酶混用PCR問題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于pfu酶PCR
已經(jīng)有8人回復(fù)
txy8469393
木蟲 (小有名氣)
拿著掃把的研究僧
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 金幣: 3477.9
- 散金: 58
- 紅花: 16
- 帖子: 258
- 在線: 117.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 217565
- 注冊(cè): 2006-03-12
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
10樓2011-07-10 08:08:51
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
rainwander(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-06-05 23:05:25
rainwander(EPI+1): 2011-06-05 23:05:29
30937747(金幣+4): 非常感謝,但是有一個(gè)問題是,我的序列是未知的,所以才做反轉(zhuǎn)錄,所以我無法確定是否突變.才必須要用高保真酶.請(qǐng)問哪種taq酶比較好? 2011-06-07 07:20:18
rainwander(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-06-05 23:05:25
rainwander(EPI+1): 2011-06-05 23:05:29
30937747(金幣+4): 非常感謝,但是有一個(gè)問題是,我的序列是未知的,所以才做反轉(zhuǎn)錄,所以我無法確定是否突變.才必須要用高保真酶.請(qǐng)問哪種taq酶比較好? 2011-06-07 07:20:18
|
樓主是想做一些基因下游實(shí)驗(yàn)吧，Taq酶的活性確實(shí)要比高保真酶的活性強(qiáng)，這是公認(rèn)的。鑒于這種情況，給你兩種可供選擇的Protocol： 1，若果你的目的片段不大，1-2.5kb，可以先用好一點(diǎn)的Taq酶擴(kuò)增了，上質(zhì)粒，測(cè)序沒有突變后，然后再用pfu酶或Phusion等高保真酶進(jìn)行亞克��； 2、如果樓主覺得上面這個(gè)方案麻煩，你可以在你的高保真酶中加入少量的高質(zhì)量的Taq酶，記住是質(zhì)量好的Taq酶，然后參照高保真酶的反應(yīng)條件進(jìn)行擴(kuò)增，也許這可以解決你的問題 Bless you！ |
2樓2011-06-05 22:11:54
phyllislhy
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 2070.6
- 紅花: 2
- 帖子: 411
- 在線: 64.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 105582
- 注冊(cè): 2005-11-16
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
3樓2011-06-07 12:44:34
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-06-07 22:40:42
rainwander(EPI+1): 2011-06-07 22:40:49
30937747(金幣+2): 是昆蟲的,我搜過了.同源性都很低.所以也找不到保守序列.是需要做RACE的,所以序列基本上等于未知~ 2011-06-08 23:09:53
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-06-07 22:40:42
rainwander(EPI+1): 2011-06-07 22:40:49
30937747(金幣+2): 是昆蟲的,我搜過了.同源性都很低.所以也找不到保守序列.是需要做RACE的,所以序列基本上等于未知~ 2011-06-08 23:09:53
|
"我的序列是未知的,所以才做反轉(zhuǎn)錄,所以我無法確定是否突變.才必須要用高保真酶.請(qǐng)問哪種taq酶比較好?" 你的序列是未知的是指不知道是什么微生物，還是不知道這個(gè)“微生物分離株”的特有序列，如果是前者，你可以用先用一般的taq酶（可以找promega或invitrogen公司的不錯(cuò)）進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增，在根據(jù)獲得的序列設(shè)計(jì)特異性引物去擴(kuò)增，這時(shí)候就可以選用高保真酶（前面提到的幾個(gè)公司都有，但價(jià)錢比較貴），不過都是pfu酶及其衍生系列。如果知道是什么微生物，就可以根據(jù)該屬的微生物已上傳的序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行擴(kuò)增。后面這種情況會(huì)順利很多。 |
4樓2011-06-07 21:18:17
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考博] 環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +3 | 睿08 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 ，六級(jí)已過，有科研經(jīng)歷 +8 | 曦熙兮 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 341求調(diào)劑 +5 | 搗蛋豬豬 2026-03-11 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +8 | 一定有學(xué)上- 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +6 | 世界首富 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，總分315，考的生物醫(yī)藥，一志愿湖南師范大學(xué)。調(diào)劑到任何專業(yè)都可以 +4 | 小丁想進(jìn)步 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 藥學(xué)383 求調(diào)劑 +3 | 藥學(xué)chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 255求調(diào)劑 +3 | 李嘉慧， 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +9 | 咪咪空空 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料工程調(diào)劑 +4 | 咪咪空空 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +7 | 無懈可擊的巨人 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|