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chunmeiyang銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
WB定量問題
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| 請(qǐng)問大家， WB是可以定量的嗎 怎么定量��？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
chunmeiyang(金幣+2): 2011-06-07 08:56:57
silicare: 謝謝，不過樓主的意思是WB定量，而不是蛋白定量方法 2011-06-07 18:23:56
silicare: 謝謝，不過樓主的意思是WB定量，而不是蛋白定量方法 2011-06-07 18:23:56
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蛋白含量的測(cè)定 （一） 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 1、從-20℃取出1mg/ml BSA，室溫融化后，備用。 2、取18個(gè)1.5ml離心管，3個(gè)一組，分別標(biāo)記為0μg，2.5μg，5.0μg ，10.0μg ，20.0μg ，40.0μg。 3、按下表在各管中加入各種試劑。 0μg 2.5μg 5.0μg 10.0μg 20.0μg 40.0μg 1mg/ml BSA － 2.5μl 5.0μl 10.0μl 20.0μl 40.0μl 0.15mol/L NaCl 100μl 97.5μl 95.0μl 90.0μl 80.0μl 60.0μl G250考馬斯亮藍(lán)溶液 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 4、混勻后，室溫放置2min。在生物分光光度計(jì)上比色分析。 （二） 檢測(cè)樣品蛋白含量 1、取足量的1.5ml離心管，每管加入4℃儲(chǔ)存的考馬斯亮藍(lán)溶液1ml。室溫放置30min后即可用于測(cè)蛋白。 2、取一管考馬斯亮藍(lán)加0.15mol/L NaCl溶液100μl，混勻放置2分鐘可做為空白樣品，將空白倒入比色杯中在做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的程序下按blank測(cè)空白樣品。 3、棄空白樣品，用無水乙醇清洗比色杯2次（每次0.5ml），再用無菌水洗一次。 4、取一管考馬斯亮藍(lán)加95μl 0.15mol/L NaCl NaCl溶液和5μl待測(cè)蛋白樣品，混勻后靜置2min，倒入扣干的比色杯中按sample鍵測(cè)樣品。 注意：每測(cè)一個(gè)樣品都要將比色杯用無水乙醇洗2次，無菌水洗一次�？赏瑫r(shí)混合好多個(gè)樣品再一起測(cè)，這樣對(duì)測(cè)定大量的蛋白樣品可節(jié)省很多時(shí)間。測(cè)得的結(jié)果是5μl樣品含的蛋白量。 100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA） BSA 0.1g 0.15 mol/L NaCl 1ml 溶解后-20℃保存。制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，用0.15 mol/L NaCl進(jìn)行100倍稀釋成1mg/ml，-20℃保存。 我們得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=0.02x+0.089(y代表OD600吸光值, x代表蛋白濃度ug/ul) 祝你好運(yùn)��！這個(gè)方法還是很好用的。 |
2樓2011-06-06 17:10:01
雪山飛狐7233
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5樓2011-06-06 19:57:22
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