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憂(yōu)游鳥(niǎo)銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求助 酶的功能基因中如何根據(jù)片段基因得到全段序列~急
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想得到一個(gè)純菌種的酶的功能基因,現(xiàn)在已設(shè)計(jì)引物得到其片段基因,如何根據(jù)片段基因得到表達(dá)這個(gè)酶的全段基因。看到文獻(xiàn)說(shuō)有根據(jù)片段基因設(shè)計(jì)反向引物測(cè)序,反向測(cè)序是不是會(huì)測(cè)出很長(zhǎng)的序列?還是直接做克。康乾F(xiàn)在又沒(méi)有全段的相關(guān)引物。還有說(shuō)純化這個(gè)酶直接氨基酸測(cè)定其N(xiāo)端氨基酸序列(好像有什么ABI Procise protein sequencer)也可以么? 重金懸賞求助啊 [ Last edited by 憂(yōu)游鳥(niǎo) on 2011-6-13 at 10:19 ] |
【分子生物】EPI帖 |
至尊木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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Originally posted by 憂(yōu)游鳥(niǎo) at 2011-06-13 10:18:01: 想得到一個(gè)純菌種的酶的功能基因,現(xiàn)在已設(shè)計(jì)引物得到其片段基因,如何根據(jù)片段基因得到表達(dá)這個(gè)酶的全段基因?吹轿墨I(xiàn)說(shuō)有根據(jù)片段基因設(shè)計(jì)反向引物測(cè)序,反向測(cè)序是不是會(huì)測(cè)出很長(zhǎng)的序列?還是直接做克隆?但是 ... 根據(jù)片段基因設(shè)計(jì)引物做RACE,分別得到3’端和5’端序列,最后序列拼接得到全長(zhǎng)cDNA序列。 |
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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Originally posted by lxj341401 at 2011-06-13 10:52:49: 你說(shuō)的兩個(gè)方法都可以的。測(cè)定N端氨基酸序前要分離純化,要求蛋白濃度較高,時(shí)間也長(zhǎng)。你既然已經(jīng)得到片段基因,也可以通過(guò)RACE(rapid-amplification ofcDNA ends)技術(shù)得到全段基因。 這個(gè)RACE 是不是要提RNA再反轉(zhuǎn)錄得到cDNA啊,難度是不是很大?是不是也根據(jù)得到的片段基因上設(shè)計(jì)反向引物呢 具體不是學(xué)分子生物的 希望你能詳細(xì)解說(shuō)一下 謝謝 |
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