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30937747木蟲 (小有名氣)
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[求助]
[求助]質(zhì)粒消除
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| 我做的是陰性菌,先前把一個質(zhì)粒電轉(zhuǎn)到宿主菌里面,現(xiàn)在想把質(zhì)粒消除掉,請問有什么好的辦法. |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+2, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-06-15 19:36:00
30937747(金幣+2): 我是這樣做的.但是沒有成功.都轉(zhuǎn)到第8批了 2011-06-19 10:05:53
amisking(金幣+2, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-06-15 19:36:00
30937747(金幣+2): 我是這樣做的.但是沒有成功.都轉(zhuǎn)到第8批了 2011-06-19 10:05:53
| 質(zhì)粒上如果有抗性，那就把含有質(zhì)粒的菌在沒有加抗生素的液體培養(yǎng)基里培養(yǎng)，在沒有抗生素這個選擇壓力下，質(zhì)粒不擴(kuò)增，隨著菌的世代增長，新生代菌體內(nèi)質(zhì)�？截悢�(shù)越來越少，到一定時間后就會產(chǎn)生不含質(zhì)粒的菌。這時候就將菌液在不含抗生素的平板上涂布，再把長出來的含有或者不含有質(zhì)粒的菌點(diǎn)到不含有抗生素的平板上，長出菌落之后再點(diǎn)到含有抗生素的平板上（用牙簽的鈍頭點(diǎn)，保證接種數(shù)量夠多），不能長出來的就是不含有質(zhì)粒的，不含有抗生素的平板上生長的相應(yīng)菌落就是想要的陰性菌了。 |
4樓2011-06-15 15:46:32
brightfuture01
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-06-15 19:35:50
30937747(金幣+2): 我先學(xué)習(xí)學(xué)習(xí).謝謝啦 2011-06-19 10:04:38
amisking(金幣+3, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-06-15 19:35:50
30937747(金幣+2): 我先學(xué)習(xí)學(xué)習(xí).謝謝啦 2011-06-19 10:04:38
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呵呵，實驗室的一個師姐曾經(jīng)用 核酸研究 上的一篇老文獻(xiàn)上的方法消除的，一次成功。 Curing of a plasmid from E.coli using high-voltage electroporation 全文鏈接： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ ... f/nar00140-0609.pdf |
2樓2011-06-15 12:45:53
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3樓2011-06-15 15:38:44
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5樓2011-06-15 15:47:35
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