paulajjh

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[交流] 純化酶的過程中如何達(dá)到4度的要求

如題，本人從事酶純化已經(jīng)有4年，純化的酶也有差不多10個吧，有的酶對溫度不敏感，中間所有的過程就不用考慮溫度這個因素，有的酶很敏感，如果不低溫，就很容易失活，純化到最后得到的酶量很少了。
文獻(xiàn)上在提到大部分酶的純化時，都會提到，在4度進(jìn)行，但這個條件很難達(dá)到，特別是大批量純化時，耗時長，步驟多，量多，即中試純化酶如何達(dá)到低溫的要求啊？
以前在實驗室有看到采用層析柜，還有專門的冷室，自己也有將室內(nèi)空調(diào)溫度打低的做法，當(dāng)然該方法不科學(xué)，實驗重復(fù)性也不好。
故請教各位蟲蟲，你們純化酶時都是怎樣做的？或者你們周圍都采用怎樣的方法控制低溫？
或者可否定做大一點點層析柜，將所需的東西都放到里面，人在外面觀察？整個冷室是不是電腦放進(jìn)去也可以？
思路還是比較亂，請大家多給些建議，謝謝了

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1樓 2011-06-18 12:28:55

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Poincare2010

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看天(金幣+2): 2011-06-19 17:37:25
paulajjh(金幣+5): 柱體積有多大？處理量有多大？可否進(jìn)一步說明，謝謝。另外層析柜可否定做 2011-06-20 10:59:32

我沒有做過，但是見過我們實驗室的人做過。樣品是在層析柜里面，那個層析柜體積很大，高約等于2.5M,寬1-2米，里面確實是放著阿卡塔自動純化系統(tǒng)（4度環(huán)境），人不用進(jìn)去，控制他的電腦放在層析柜的外面。人隔著玻璃能看到里面的東西，具體數(shù)據(jù)。出峰時間有電腦來檢測，記錄。

[ Last edited by Poincare2010 on 2011-6-19 at 15:17 ]

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2樓2011-06-19 15:15:17

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冼亮淀粉酶

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paulajjh(金幣+1): 沒有純化過，但是想跟你確認(rèn)下，你的淀粉酶酶活測定方法是怎樣的？這個酶需要很多離子激活劑的，底物你采用的什么，可給我發(fā)站內(nèi)消息溝通 2011-06-20 11:01:07

樓主有沒有純化過淀粉酶？

有沒有試過明明能耐受某個pH值和氯化鈉的，但是一掛柱交換之后就測不出活力了？

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3樓2011-06-19 15:33:53

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fuming123

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paulajjh(金幣+2): 專門的大型層析柜？怎樣理解專門？每步配置一個？大型是定做的嗎？可否進(jìn)一步說明？ 2011-06-20 11:01:59

常規(guī)的做法就是盡量整個過程在層析柜做很多純化系統(tǒng)都會匹配專門的大型層析柜

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6樓2011-06-19 16:37:53

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Poincare2010

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paulajjh(金幣+1): 恩 2011-06-21 15:59:41

引用回帖:

Originally posted by Poincare2010 at 2011-06-19 15:15:17:
我沒有做過，但是見過我們實驗室的人做過。樣品是在層析柜里面，那個層析柜體積很大，高約等于2.5M,寬1-2米，里面確實是放著阿卡塔自動純化系統(tǒng)（4度環(huán)境），人不用進(jìn)去，控制他的電腦放在層析柜的外面。人隔著玻 ...

我沒做過，真的不知道呀。不過層析柜有專門賣的，你可以到網(wǎng)上搜一下，AKATA純化系統(tǒng)一般都放在里面

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7樓2011-06-20 21:44:49

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liuyuexinfei

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
paulajjh(金幣+1): 謝謝 2011-06-21 16:00:02

我們實驗室的方法同2樓

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8樓2011-06-21 15:10:17

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簡單回復(fù)

leimiao_hit4樓

2011-06-19 15:47 回復(fù)

引用回帖:

Originally posted by paulajjh at 2011-06-18 12:28:55: 如題，本人從事酶純化已經(jīng)有4年，純化的酶也有差不多10個吧，有的酶對溫度不敏感，中間所有的過程就不用考慮溫度這個因素，有的酶很敏感，如果不低溫，就很容易失活，純化到最后得到的酶量很少了。文獻(xiàn)上在提到 ...

祝福

qiuxiumei1605樓

2011-06-19 15:53 回復(fù)

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