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佳木的復(fù)制品金蟲 (正式寫手)
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[求助]
候選基因功能驗證
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我通過用T-DNA激活標(biāo)簽（35S）插入突變獲得抗旱相關(guān)突變體，最后確定了T-DNA附近的A、B、C、D四個候選基因，將這四個候選基因分別構(gòu)建過表達(dá)載體，最后得到A、B、C、D四個候選基因的過表達(dá)轉(zhuǎn)基因T0苗各30株。 我的目的是要驗證這些候選基因哪個是真的跟抗旱相關(guān)，請問： 1）我應(yīng)該用這些過表達(dá)的T0苗來做干旱試驗？還是用T0繁種得到的T1，然后用過表達(dá)的T1來做干旱試驗？還是用過表達(dá)的T2來做干旱試驗？為什么？ 2）如果用T0或T1苗來做驗證？需要多少株苗？為什么？（比如我用了30株過表達(dá)基因A的T0苗做實驗，結(jié)果有7株抗旱，23株不抗旱，那怎么去分析這個結(jié)果，這個基因A與抗旱相關(guān)的嗎？如果結(jié)果是有23株抗旱，7株不抗旱或者是15株抗旱15株不抗旱，這個結(jié)果又該怎么分析呢？） 3）如果用過表達(dá)的T2來做實驗，由于在T2已經(jīng)分離了，所以T2植株會有過表達(dá)的純合子和過表達(dá)的雜合子，用這個過表達(dá)的純合子和過表達(dá)的雜合子做實驗有什么區(qū)別？ |
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gwbk
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3樓2011-06-21 20:28:22
ydniu
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2樓2011-06-21 16:25:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+6, EPI+1): 很厲害！ 2011-06-23 14:43:58
佳木的復(fù)制品(金幣+50): 非常感謝�。�！ 2011-07-08 15:33:58
西瓜(金幣+6, EPI+1): 很厲害！ 2011-06-23 14:43:58
佳木的復(fù)制品(金幣+50): 非常感謝�。�！ 2011-07-08 15:33:58
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實驗設(shè)計： 1 需要增加 互補(bǔ)驗證的轉(zhuǎn)化體 確定能夠互補(bǔ)突變體表型，方能確定該基因為你要尋找的而目標(biāo)基因。 2 關(guān)于實驗數(shù)據(jù)的分析，首先建立抗旱的指標(biāo)，不能簡單的說是抗還是不抗，比如1級，2級，3級等。在T0代，將目標(biāo)超標(biāo)達(dá)各轉(zhuǎn)化系（以及對照和突變體） 進(jìn)行抗旱處理，采集各轉(zhuǎn)化系的抗性等級，及其處理前后目標(biāo)基因表達(dá)定量的數(shù)據(jù)。 3 當(dāng)然條件許可用T1和T2來做則更好，可以進(jìn)行三次重復(fù) 4 補(bǔ)充一點(diǎn)：超表達(dá)的各轉(zhuǎn)化系有不同的抗性水平是正常的，只要按編號羅列上去就可以了。如有目標(biāo)基因的表達(dá)數(shù)據(jù)與其匹配，則更加 |
4樓2011-06-23 12:46:49
webmasterone752
金蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜(金幣+5, EPI+1): 看來又是牛人，呵呵～ 2011-06-23 23:15:21
佳木的復(fù)制品(金幣+50): 非常感謝�。。� 2011-07-08 15:34:08
西瓜(金幣+5, EPI+1): 看來又是牛人，呵呵～ 2011-06-23 23:15:21
佳木的復(fù)制品(金幣+50): 非常感謝�。。� 2011-07-08 15:34:08
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（1-3）樓主。。檔次較高的雜志是不承認(rèn)T0、T1代得實驗結(jié)果的啊，也就是說你必須通過T3代來篩選出純合后用T3代進(jìn)行實驗；同時，至少給出4以上line說明同一表型，才能去說服他們相信你的結(jié)果。 因此你ABCD四個基因分別獲得了30棵苗，這是個很好的開始啊。雖然后續(xù)的篩選工作量大些，但是是很有希望獲得好結(jié)果的。 最后如果得出結(jié)論是ABCD中某個基因有功能，再做它的過表達(dá)等等。。。 希望回復(fù)對你有幫助。 |
5樓2011-06-23 22:07:14
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