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henghuibio新蟲 (小有名氣)
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這樣選擇合適的離子交換介質(zhì) 已有1人參與
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離子交換層析分離純化生物大分子的過程，主要是利用各種分子的可離解性、離子的凈電荷、表面電荷分布的電性差異而進(jìn)行選擇分離的�，F(xiàn)已成為分離純化生化制品、蛋白質(zhì)、多肽等物質(zhì)中使用最頻繁的純化技術(shù)之一。 1. 離子交換介質(zhì)的選擇 在進(jìn)行分離純化時，要求層析柱具有高負(fù)載量、易于操作及使用壽命長等特點(diǎn)，其中分離介質(zhì)是最主要的影響因素，因此，分離介質(zhì)的選擇尤為重要。 1.1 品種的選擇： 應(yīng)根據(jù)被分離純化目標(biāo)產(chǎn)物所帶電荷的種類、分子的大小、物理化學(xué)性質(zhì)及所處的微環(huán)境等因素，選擇適宜的離子交換層析介質(zhì)。對于無機(jī)小分子而言，分離介質(zhì)的選擇相對容易，但對于生物大分子就必須考慮更多的因素。 蛋白質(zhì)等生物大分子是由多種氨基酸所組成的，在不同的pH條件下顯示不同的電性，而生物大分子對最適宜的pH環(huán)境具有特定的要求，因此，必須首先了解目標(biāo)蛋白的等電點(diǎn)及適宜的微環(huán)境，根據(jù)這些條件選擇合適的離子交換劑種類。 選擇陽離子交換劑還是陰離子交換劑，主要取決于被分離的物質(zhì)在其穩(wěn)定的pH 下所帶的電荷，如果帶正電，則選擇陽離子交換劑；如帶負(fù)電，則選擇陰離子交換劑。例如待分離的蛋白等電點(diǎn)為4，穩(wěn)定的pH 范圍為6~9，由于這時蛋白帶負(fù)電，故應(yīng)選擇陰離子交換劑進(jìn)行分離。 1.2 骨架的選擇： 應(yīng)根據(jù)目標(biāo)產(chǎn)品的產(chǎn)量、要求達(dá)到的純度及經(jīng)濟(jì)價值等因素，選擇合適骨架（基質(zhì)）的離子交換劑。 通用型的聚苯乙烯離子交換樹脂具有結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、價格低廉、全交換容量高等特點(diǎn)，適用于如抗生素、有機(jī)酸、動物資源或植物資源的有效成分等一般生化制品的提取分離工藝。而對于要求分辨率高、制品純度高的一些高附加值的基因工程產(chǎn)品，仍需使用纖維素、葡聚糖、瓊脂糖為基質(zhì)的生化分離專用介質(zhì)。 纖維素離子交換劑價格較低，但分辨率和穩(wěn)定性都較低，適于初步分離和大量制備。葡聚糖離子交換劑的分辨率和價格適中，但受外界影響較大，體積可能隨離子強(qiáng)度和pH 變化有較大改變，影響分辨率。瓊脂糖離子交換劑機(jī)械穩(wěn)定性較好，分辨率也較高，但價格較貴。 理想的分離介質(zhì)應(yīng)該不但易于吸附，還要易于洗脫，如果目標(biāo)產(chǎn)物對于離子強(qiáng)度和pH值的變化不敏感，可以考慮采用高電荷密度的強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性的強(qiáng)型介質(zhì)。如果對這些因素比較敏感，則應(yīng)采用弱酸性或弱堿性的弱型介質(zhì)。如果大分子物質(zhì)被吸附后，結(jié)合比較牢固，往往難以洗脫，采用苛刻的條件又容易引起大分子的變性，則應(yīng)選用功能基團(tuán)密度低的介質(zhì)。 強(qiáng)酸性或強(qiáng)堿性的強(qiáng)型介質(zhì)，適用的pH 范圍廣，常用于分離一些小分子物質(zhì)或在極端pH 下的分離，但由于電性較強(qiáng)，有時易使一些敏感的生物分子變性或失活。弱酸性或弱堿性的弱型介質(zhì)，其選擇性有較大的范圍，且不易使蛋白質(zhì)失活，故一般適用于分離蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，但其適用的pH范圍較窄。 [ Last edited by henghuibio on 2011-6-24 at 15:55 ] |
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2樓2011-06-24 20:56:25
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