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320080920001金蟲 (正式寫手)
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[交流]
單克隆抗體原理疑問(wèn)
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| 我在看單克隆抗體時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)問(wèn)題，在用HAT培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞時(shí)，我們是通過(guò)骨髓瘤細(xì)胞的HGPRT和TK酶缺陷在HAT培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，而正常B細(xì)胞由于繁殖代數(shù)限制而不能生長(zhǎng)，只有雜交瘤細(xì)胞能夠通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA而存活。但是問(wèn)題是如果正常B細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞自轉(zhuǎn)化或者人工誘變轉(zhuǎn)化的話又可以生存了，如何避免這一步造成的雜交瘤細(xì)胞污染呢？ |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
320080920001(金幣+5): 謝謝你的解釋，說(shuō)的很好，以后還是要多想想了。不過(guò)你說(shuō)的誘導(dǎo)B細(xì)胞自轉(zhuǎn)化，難道以前雜交瘤細(xì)胞方法還沒有出來(lái)時(shí)，做單抗沒有嘗試誘導(dǎo)B細(xì)胞自轉(zhuǎn)化嗎？ 2011-06-30 23:10:43
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
320080920001(金幣+5): 謝謝你的解釋，說(shuō)的很好，以后還是要多想想了。不過(guò)你說(shuō)的誘導(dǎo)B細(xì)胞自轉(zhuǎn)化，難道以前雜交瘤細(xì)胞方法還沒有出來(lái)時(shí)，做單抗沒有嘗試誘導(dǎo)B細(xì)胞自轉(zhuǎn)化嗎？ 2011-06-30 23:10:43
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呵呵，這個(gè)問(wèn)題問(wèn)的非常好�。�！ 為什么要做單克隆抗體呢，就是因?yàn)轶w外的B細(xì)胞由于繁殖代數(shù)限制而不能生長(zhǎng)，所以需要加入可以永生的骨髓瘤細(xì)胞，從而通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)或者腹水可重復(fù)的獲得大量的抗體。如果閣下可以使分化程度較高的B細(xì)胞發(fā)生自轉(zhuǎn)化或者人工誘變轉(zhuǎn)化從而可以永生且穩(wěn)定的分泌抗體的話，恭喜你啊，同學(xué)，只要你把專利搞到手，成為下一比爾蓋茨不是夢(mèng)！ 扯遠(yuǎn)了，首先，至少我不知道在做細(xì)胞融合的時(shí)候能產(chǎn)生什么條件使得正常B細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞自轉(zhuǎn)化或者人工誘變轉(zhuǎn)化，從而使其生存下來(lái)。其次，如果真的發(fā)生了，而且這種B細(xì)胞可以永久繁殖且分泌抗體的話，你就可以準(zhǔn)備申請(qǐng)專利然后過(guò)億萬(wàn)富翁的生活了。最后，如果正常B細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞自轉(zhuǎn)化或者人工誘變轉(zhuǎn)化而獲得了永生能力，但失去了分泌抗體的能力的話，由于雜交瘤是貼壁的，B細(xì)胞是懸浮的，應(yīng)該可以分開的。如果正常B細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞自轉(zhuǎn)化或者人工誘變轉(zhuǎn)化變成了貼壁細(xì)胞，那也可以通過(guò)亞克隆的方法來(lái)將雜交瘤細(xì)胞和B細(xì)胞分開。其方法也很簡(jiǎn)單，在96孔板中通過(guò)梯度稀釋，使得一個(gè)孔中只有一個(gè)或幾個(gè)細(xì)胞，然后讓細(xì)胞繁殖，然后通過(guò)ELISA檢查該孔中有沒有抗體。如果有，那么這個(gè)孔肯定只有雜交瘤細(xì)胞；如果沒有抗體，則為B細(xì)胞。經(jīng)過(guò)幾次的亞克隆，基本就能獲得幾株完全為雜交瘤的細(xì)胞株。 |
2樓2011-06-30 22:33:27
3樓2013-11-19 15:40:24
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