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scelab榮譽(yù)版主 (文壇精英)
小木蟲之有關(guān)部門負(fù)責(zé)人
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[求助]
提質(zhì)粒濃度太小，條帶不亮，有圖求真相
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RT 之前一切都正常，現(xiàn)在無法重現(xiàn)  1 ml菌液，提完質(zhì)粒50ul定容，上樣2ul。如圖 曾經(jīng)試過多次轉(zhuǎn)接；質(zhì)粒重新轉(zhuǎn)化新的DH5a；OD=1時(shí)添加氯霉素等方法，仍然很淡。  難道原因是搖床和LB？  求真相  |
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dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很謙虛 2011-07-03 21:04:17
dhd997(金幣+5, EPI+1): 2011-07-03 18:08:40
1949stone(EPI-1): 很謙虛 2011-07-03 21:04:17
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那是不是抗生素失效了？沒有選擇壓力的時(shí)候質(zhì)粒不擴(kuò)增的。似乎隱約是有兩條帶，還隔得挺遠(yuǎn)的，莫非是兩個(gè)質(zhì)粒？DH5a用來表達(dá)？ 如果用4毫升菌液，我覺得質(zhì)粒的量應(yīng)該會(huì)增多的，溶液123容量看著變化就行了。不增加用量也行，關(guān)鍵是看溶液2能不能使得菌液澄清，澄清了就表示足夠保證效果了。 你的質(zhì)粒那么小，外源看起來也不大，加一個(gè)M，1kb就行了，右邊還加一個(gè)，浪費(fèi)了。膠底下氣泡N多，放膠的時(shí)候膠不要太干，放得溫柔一點(diǎn)就沒有了，從一側(cè)放下去。還有我覺得RNA這么遠(yuǎn)，不會(huì)掩蓋質(zhì)粒的，質(zhì)粒要達(dá)到被掩蓋的程度，那RNA也太多了，或者說質(zhì)粒也太小，才1KB左右才會(huì)跟RNA混，你的質(zhì)粒沒那么小。 |
10樓2011-07-03 16:20:25
冼亮淀粉酶
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13樓2011-07-03 18:12:49
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