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zzgbest007銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
減壓柱層析 已有5人參與
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| 大家有沒有用過減壓柱層析的?對于柱子一般裝多高?樣品層又多高?二者有沒有一定的比例??如何根據(jù)薄層展開來選擇過柱子的比例(或者說一般把Rf值控制在什么范圍內(nèi),比較適合上。?謝謝了。! |
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至尊木蟲 (著名寫手)
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減壓柱優(yōu)點在于上樣量大,缺點在于分離效果較差。我前段時間做工藝跑了一年的減壓柱,給你總結(jié)下吧。 1:上樣,我們做植化采用的是直徑30cm的布氏漏斗,上樣量最多150g,拌樣硅膠200g,柱硅膠400g左右,這時候柱硅膠基本上比拌好的樣品就高一點。做工藝的時候,只要其中的一個單體,上下距離比較遠(yuǎn)的情況,采用直徑80CM的布氏漏斗,樣品一公斤,拌樣硅膠1.5kg,柱硅膠1kg,這時候柱硅膠遠(yuǎn)低于拌好的樣品。 2:洗脫,一搬3個柱體積一個梯度,植化粗分時候基本7到8個梯度,100-200g樣品2天內(nèi)完成。 最大的特點是上樣量大,以前大柱子上樣最多也就幾百克,要跑一個月,現(xiàn)在可以上1kg 的樣品,最快兩天就能跑完,粗分的話效果和普通大柱子差不多,而且可以減少大極性樣品的死吸附。 缺點:幾十克到十幾克的樣品就不推薦了,普通的加壓柱就可以搞定,效果一般都比較好 |

銀蟲 (小有名氣)
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