伊娃EVA

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[求助] 谷胱甘肽修飾的CdTe EDC NHS法連抗體連不上

想請教蟲蟲們  我現(xiàn)在在用谷胱甘肽修飾的CdTe與抗體連接然后想進行熒光免疫分析 FLISA  有沒有可行性��？

現(xiàn)在主要是連都連不上用EDC NHS的方法，然后透析

比例為量子點：EDC：NHS:抗體=300:5:5:1  先是量子點和EDC NHS攪拌5min 然后加抗體然后過夜攪拌然后透析

就沒有熒光了總是連不上

我應(yīng)該注意些什么哪些是不對的啊

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1樓 2011-07-06 09:56:27

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weiwei_he

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5樓: Originally posted by huyihui2010 at 2011-12-17 10:30:44:
你好，請問你的問題解決了否？我最近也在做跟你一樣的工作，請問這個透射電鏡要怎么來分析交聯(lián)結(jié)果的��？還有其他方法可以來證明不啊？期待回復(fù)，感謝！

負(fù)染之后再看透射電鏡，看量子點與蛋白的距離。

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nopains,nogains

6樓2011-12-18 08:45:43

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tommayer

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【答案】應(yīng)助回帖

伊娃EVA(金幣+2): 謝謝回復(fù)~~~~~~~ 2011-07-06 11:04:55

這東西怕NHS的，一加進去馬上熒光就沒了，單獨用EDC吧，但是偶聯(lián)完之后熒光還是會淬滅很多。而且偶聯(lián)產(chǎn)物也不好放，熒光會慢慢淬滅。和樓主同行。多交流，站內(nèi)信！

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2樓2011-07-06 10:40:02

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whgcdxkj

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【答案】應(yīng)助回帖

伊娃EVA(金幣+5): 多謝回帖~~~~~這么復(fù)雜啊我要愁死了做不出來 2011-07-08 08:06:18

就我了解，你的量子點與EDC、NHS的比例有誤，應(yīng)該是EDC、NHS比量子點的摩爾數(shù)大百倍以上。還有一點，雖然有人成功報道，但是我總認(rèn)為，谷胱甘肽中的羧基和氨基之間會不會有影響，加劇量子點聚集。還有ph值也要注意。文獻(xiàn)多報道加入抗體后，是不是應(yīng)該在室溫下在放置一段時間再置于4°下。

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3樓2011-07-07 20:14:37

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weiwei_he

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想請教蟲蟲們，我最近也在做EDC交聯(lián)量子點和蛋白，羧基活化后量子點加入蛋白后，也產(chǎn)生沉淀，而且熒光也降低，是什么原因��？負(fù)染后，透射電鏡結(jié)果分析，基本沒交聯(lián)。

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nopains,nogains

4樓2011-09-26 15:19:56

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huyihui2010

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4樓: Originally posted by weiwei_he at 2011-09-26 15:19:56:
想請教蟲蟲們，我最近也在做EDC交聯(lián)量子點和蛋白，羧基活化后量子點加入蛋白后，也產(chǎn)生沉淀，而且熒光也降低，是什么原因�。控�(fù)染后，透射電鏡結(jié)果分析，基本沒交聯(lián)。

你好，請問你的問題解決了否？我最近也在做跟你一樣的工作，請問這個透射電鏡要怎么來分析交聯(lián)結(jié)果的��？還有其他方法可以來證明不啊？期待回復(fù)，感謝！

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5樓2011-12-17 10:30:44

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6樓: Originally posted by weiwei_he at 2011-12-18 08:45:43:
負(fù)染之后再看透射電鏡，看量子點與蛋白的距離。

請問在整個交聯(lián)過程中有哪些細(xì)節(jié)要注意啊，1mg/ml的量子點，5mM sulf-NHS和10mM的EDC在37°下活化1h后，再加蛋白質(zhì)（鏈霉親和素），繼續(xù)在37°下?lián)u床反應(yīng)2h，不知道為什么就是交聯(lián)不上去啊。求解，感謝！

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7樓2011-12-18 10:32:20

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我是在常溫下反應(yīng)24h，EDC和NHS加的摩爾數(shù)等量，與量子點是5000:1的摩爾比。

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nopains,nogains

8樓2011-12-18 20:22:59

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huyihui2010

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8樓: Originally posted by weiwei_he at 2011-12-18 20:22:59:
我是在常溫下反應(yīng)24h，EDC和NHS加的摩爾數(shù)等量，與量子點是5000:1的摩爾比。

非常感謝！呵呵...我試試，有問題再來請教你哦！可以加下你QQ不��？

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9樓2011-12-18 21:19:25

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royhahaha

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感覺抗體加的有點少.

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10樓2012-02-17 11:03:49

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