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[求助]
有沒有做植物重金屬脅迫方面的朋友
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獲得了一批轉(zhuǎn)基因煙草材料 想看看是否具有抗重金屬的特性 但還不知道如何開展 求賜教 |
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forestbin
銅蟲 (小有名氣)
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（目標）煙草 我覺得主要還是應(yīng)該從“抗”入手，而不應(yīng)把精力放在“耐”上：即外部濃度在多高的情況下，生物量沒有顯著受到抑制，且體內(nèi)累積的重金屬也少。這樣意義才比較大。 （指標）有了目標，需要測定的指標也就好定了。不要急于上分子試驗�？梢韵葟暮唵蔚呐囵B(yǎng)試驗開始。比如Cd為例，土培的話，0,1,2,5,10 ppm試一下。水培的話，0,0.5,1.0,1.5,3.0 ppm較為合適（因為水中Cd活度遠高于土壤。） 建議土培，比較方便，參照常規(guī)的種植技術(shù)就可以了。配置Cd土時，最好不要直接澆溶液，這樣很難做到均勻。可將少量土壤溶在高濃度的Cd溶液中，慢慢晾干，即為母土。再將母土按比例均勻的摻入無污染的圖中。 水培的話，將煙草在石英砂或珍珠巖里生長，澆灌1/4左右濃度的霍格蘭營養(yǎng)液，然后過一段時間再移栽在水培灌里。注意每天要打氣。 考察的指標，就是地上部和根部的生物量，以及其中的Cd濃度，以確定上面所提的目標。 （機理）有了初步的研究結(jié)果，就可以根據(jù)此結(jié)果研究其機理，即為什么會這樣�？梢苑治隹寡趸到y(tǒng)（SOD、POD、CAT、H2O2、GSH等等），此為常用的耐性指標。也可以分析細胞壁及細胞質(zhì)中Cd濃度，是否有細胞壁固定作用。如果再為深入，就研究膜上的轉(zhuǎn)移蛋白，及H+泵等，對應(yīng)的基因是否上調(diào)？是否是“拒”吸的內(nèi)在因素。 （原則）煙草如果體內(nèi)累積較多的重金屬，即使其再有耐性，也失去了其應(yīng)用的意義。 PS：上述只是實驗室機理的工作，濃度若設(shè)的低，從機理研究上，可能所得結(jié)果差異很小，誤差較大，最后甚至是徒勞無功。而大田土壤Cd濃度1ppm 為國標，若考慮實際應(yīng)用，不考慮機理，可酌情縮減試驗濃度。 |
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lxjwishes9樓2011-08-07 19:18:24
jhu132llh
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2樓2011-07-14 16:49:18
【答案】應(yīng)助回帖
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jhu132llh(金幣+2, EPI+1): good,版主積極應(yīng)助 2011-07-16 18:09:25
lxjwishes(金幣+3): 現(xiàn)在在糾結(jié)脅迫濃度和加了脅迫物質(zhì)，我想做的有重金屬，激素，還有鹽脅迫和PEG，培養(yǎng)基可否滅菌的問題 2011-07-18 08:59:32
jhu132llh(金幣+2, EPI+1): good,版主積極應(yīng)助 2011-07-16 18:09:25
lxjwishes(金幣+3): 現(xiàn)在在糾結(jié)脅迫濃度和加了脅迫物質(zhì)，我想做的有重金屬，激素，還有鹽脅迫和PEG，培養(yǎng)基可否滅菌的問題 2011-07-18 08:59:32
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我不是做重金屬的，但是知道一點點脅迫相關(guān)的東東 我覺得首先得鑒定吧，在MS板上加上相應(yīng)的重金屬鹽，觀察癥狀，看其是否確實抗重金屬 然后可以找一些paper中提到的相關(guān)重金屬脅迫的基因，做Real-time或Northern來看你的轉(zhuǎn)基因煙草相對于WT煙草是否重金屬脅迫相關(guān)基因的mRNA表達水平有變化，進而確定你的轉(zhuǎn)基因是哪個通路上的~ |
3樓2011-07-14 22:24:17
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Violet2118
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7樓2011-08-02 05:21:52
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8樓2011-08-06 17:29:41
10樓2011-08-09 17:31:59
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