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笑了樂

新蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能

[求助] 醇提物對CCl4致肝損傷的保護(hù)作用

我看了一些資料，養(yǎng)小鼠，有養(yǎng)一周的，也有養(yǎng)一個月的，
如：
例一：　模型與藥物處理　取小鼠70 只, 隨機(jī)分成5組, 每組14 只, 雌雄各半, 分為正常組、CCl4 損傷模型組、川西獐牙菜醇提物高、中、低劑量組。正常組和模型組飼喂生理鹽水(10ml/ kg) , 其他各組以等體積相應(yīng)藥物灌胃, 每天1 次, 連續(xù)7d。末次給藥1h 后, 除正常組腹腔注射等體積精制植物油外,其余各組腹腔注射0112 %CCl4 植物油溶液10mL/ kg ,禁食不禁水。13h 后斷頸取血, 離心機(jī)在(3000 轉(zhuǎn)/min) 條件下, 分離血清; 取肝臟用冷生理鹽水制備10 %肝組織勻漿; 取肝臟最大葉, 切成5mm ×5mm ×3mm 小塊置于10 %甲醛液固定24h

例二：小鼠在SPF 級動物實驗室內(nèi)喂飼基礎(chǔ)飼料觀察3 d 后, 根據(jù)體重隨機(jī)分為7 組, 即: 空白對照組、模型對照組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組( 200 mg / ( kg 􀀁 d ) ) 、醇提組( 500 mg/( kg 􀀁 d) ) 、水提物低、中、高劑量組( 200、500、1 000mg / ( kg 􀀁 d) ) , 每組10 只。開始實驗后, 各劑量組小鼠灌胃給予受試溶液, 陽性對照組灌胃聯(lián)苯雙酯混懸液, 模型對照組和陰性對照組給予蒸餾水, 灌胃量為20 mL/ kg, 灌胃1 次/ d, 連續(xù)30 d。每周稱重一次, 按體重調(diào)整灌胃量，實驗至第30 天時，將各組動物隔夜禁食16 h, 模型組及各樣品組一次灌胃給予體積分?jǐn)?shù)1% 的CCl4 植物油, 灌胃量為5mL/ kg, 建立肝損傷模型; 空白對照組給植物油, 間隔4 h 后, 受試組繼續(xù)給予受試樣品。給予CCl4 24 h 后, 摘除眼球取血, 分離血清, 處死小鼠, 快速取出肝臟, 制成肝勻漿用于指標(biāo)測定。

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招聘：游戲測試員，要求會玩斗地主、麻將、等棋牌游戲，有意者加我微信lewoxiao請備注“游戲測試員”否則不加

1樓 2011-07-19 20:29:30

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zygtlp258

禁蟲 (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

笑了樂(金幣+30, 博學(xué)EPI+1): 只是復(fù)制過來，沒有回答我的問題，還是加分吧 2011-09-14 09:44:38

【摘要】  　　目的研究黃根醇提物對四氯化碳所致大鼠肝纖維化的保護(hù)作用。方法大鼠首次于背部皮下注射純CCl4 5 ml/kg，以后每周2次注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，連續(xù)注射8周。8周后取血，計算大鼠的肝脾指數(shù)，檢測大鼠血清中ALT，AST的活性及其總蛋白（TP）、白蛋白(Alb)的含量，計算白蛋白與球蛋白的比值；檢測血清中透明質(zhì)酸(HA)、層黏連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)、Ⅳ型膠原(CⅣ) 的含量；檢測肝臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、羥脯氨酸（Hyp）含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平。結(jié)果黃根醇提物能明顯降低CCl4所致的大鼠肝纖維化肝脾指數(shù)的升高(P<0.01)和血清中ALT，AST活性的升高(P<0.01)，降低血清中HA，LN ，PCⅢ，CIV，GLB的含量(P<0.01)，升高血清中的TP，ALB含量和A/G的比值(P<0.01)；降低肝組織中MDA 的水平和Hyp 的含量(P<0.01)，亦能升高肝組織中SOD的活性和GSH-Px的水平(P<0.01)。結(jié)論黃根醇提物具有顯著的抗肝纖維化的作用。
肝纖維化是慢性肝病重要的病理特征，也是進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的主要中間環(huán)節(jié)［1］。目前研究認(rèn)為肝纖維化是一個動態(tài)過程，尚屬于可逆性病變，其轉(zhuǎn)歸與肝損傷因素是否持續(xù)存在有關(guān)，如果得到及時徹底治療，肝損傷停止發(fā)展，則肝纖維化多可逆轉(zhuǎn)；病情如不斷發(fā)展則可能導(dǎo)致肝硬化甚至肝癌［2］。因此，肝纖維化的防治在臨床上具有十分重要的意義。黃根Prismatomeris tetrandra，為壯醫(yī)用藥，具有軟堅散結(jié)、利濕退黃等功效［3］，廣西民間多用其治療慢性肝炎［4］。本研究采用四氯化碳(CCl4)所致慢性大鼠肝纖維化模型，探討黃根醇提物對肝纖維化的影響。本文實驗尚屬首次。

　　1  器材

　　1.1  藥品谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）試劑盒（批號 20060620），超氧化物歧化酶（SOD）測試盒（批號 20060610），丙二醛（MDA）測試盒（批號 20060615），谷胱甘肽過氧化物酶（GSH）測試盒和考馬斯亮蘭蛋白測定試劑盒（批號 20060620），以上試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。秋水仙堿，為昆明制藥藥品銷售有限公司產(chǎn)品，批號 20060418。四氯化碳(CCl4，分析純)，為重慶川江化學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號  20050426，實驗時用花生油配成0.08%四氯化碳溶液。黃根，由廣西藥材站購進(jìn)，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院藥用植物教研室韋松基副教授鑒定為茜草科植物三角瓣花Prismatomeris tetrandra（Rox -b.） K. Schum. 的根。

　　1.2  動物清潔級Wistar大鼠，雌雄各半，體重160～200 g。由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：SCXK桂2003～0003。

　　1.3  黃根醇提物的制備

　　將黃根粉碎成粗粉，用乙醇加熱回流提取兩次，合并提取液，濾過，濃縮至無醇味，加水稀釋致所需濃度，于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br />
　　1.4  儀器

　　Biofuge strutos型高速低溫離心機(jī)（Kendro Laboratory products）。JY92-2D型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝科器研究所）。YKH-I型液體快速混合器（江西醫(yī)療器械廠）。Agilent8453紫外分光光度計。ZFQ-85A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海安亭電子儀器廠）。

　　2  方法［5］

　　2.1  造模采用CCl4造成大鼠肝纖維化模型，除正常組外，其余各組每只大鼠首次于背部皮下注射純CCI4 5 ml/kg，以后皮下注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，每周注射2次，共8周。

　　2.2  分組與給藥將大鼠隨機(jī)分為6組，每組各16只，即正常組，模型組，陽性組，黃根醇提物高、中、低劑量組。造模與給藥同時進(jìn)行。各組每天灌胃（ig）給藥，給藥容量為20 ml·(kg-1·d-1)，連續(xù)8周。正常組和模型組給予蒸餾水，陽性組給予秋水仙堿0.2 mg/kg，高、中、低劑量組分別灌胃黃根醇提物12，6，3 g 生藥/kg。股動脈取血，常規(guī)分離血清，大鼠處死前禁食不禁水24 h。

　　2.3  檢測指標(biāo)檢測血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性及其總蛋白（TP）、白蛋白(ALB)的含量，計算白蛋白與球蛋白的比值（A/G）；并檢測血清中的肝纖維化四項指標(biāo)，即檢測Ⅲ型前膠原(ProcollagenⅢ,PCⅢ)、IV型膠原（Collagen Type IV，CIV）、透明質(zhì)酸(Hyaluronicacid,HA)和層粘連蛋白(Laminin,LN)的含量。取肝臟、脾臟稱量，計算肝指數(shù)、脾指數(shù)；并用肉眼觀察大鼠肝臟的外形、體積、顏色、質(zhì)地的改變，一部分肝臟用生理鹽水制成10%的肝勻漿，用于檢測肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）的活性、羥脯氨酸（Hyp）的含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH）的水平。

　　2.4  數(shù)據(jù)處理各組實驗數(shù)據(jù)均以±s表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行組間t檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　3  結(jié)果

　　3.1  黃根醇提物對大鼠肝臟、脾臟系數(shù)的影響見表1。與正常組比較，模型組大鼠肝脾重量明顯增加，肝脾指數(shù)明顯升高（P<0.05）。與模型組比較，黃根醇提物各劑量組大鼠肝脾指數(shù)顯著降低（P<0.01），并能明顯降低肝脾的重量（P<0.01）。結(jié)果提示，黃根醇提物能明顯對抗CCl4導(dǎo)致的肝纖維化大鼠肝脾指數(shù)的升高。表1  黃根醇提物對CCl4致肝纖維化大鼠的肝脾重量及肝脾指數(shù)的影響
3.2  黃根醇提物對大鼠血清中ALT，AST的影響見表2。常規(guī)分離血清，按照說明書的要求測試ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶），AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）的活性。與正常組比較，模型組大鼠血清中ALT，AST活性顯著升高（P<0.01），提示造模成功。與模型組比較，黃根醇提物各劑量組大鼠血清中ALT，AST的活性顯著降低（P<0.01）。與高劑量組比較，中劑量組大鼠血清中ALT的活性有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果提示，黃根醇提物能顯著對抗CCl4導(dǎo)致的肝纖維大鼠血清中ALT，AST的活性升高。表2  黃根醇提物對CCl4致肝纖維化大鼠血清中ALT，AST活性的影響（略）

　　3.3  黃根醇提物對大鼠血清中TP，ALB，GLB，A/G的影響見表3。常規(guī)分離血清，按照說明書的要求測試大鼠血清中的TP（血清總蛋白）、ALB（血清白蛋白）的含量，并計算出GLB（血清球蛋白）的含量和A/G（白蛋白/球蛋白比值）的比值。與正常對照組比較，模型組血清TP，ALB的含量和A/G的比值遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于正常對照組（P<0.01），模型組大鼠血清中ALB含量降低的同時GLB含量相應(yīng)增加，提示造模成功。與模型組比較，黃根醇提物各劑量組大鼠血清中TP，ALB的含量和A/G的比值明顯升高（P<0.01），而GLB的含量明顯降低（P<0.01）。結(jié)果提示，黃根醇提物能顯著對抗CCl4導(dǎo)致的肝纖維化大鼠血清中TP的含量和A/G比值的降低，亦能對抗血清中ALB和GLB含量的逆轉(zhuǎn)。表3  黃根醇提物對CCl4致肝纖維化大鼠血清TP，ALB，GLB及 A/G的影響(略)

　　3.4  黃根醇提物對大鼠血清中肝纖維化四項的影響結(jié)果見表4。常規(guī)分離血清，按照說明書的要求測試大鼠血清中的的HA（透明質(zhì)酸）、LN（層黏連蛋白）、PCⅢ（Ⅲ型前膠原）、CⅣ（IV型膠原）的含量。與正常對照組相比,模型組大鼠血清中HA，LN，PCⅢ，CⅣ的含量均顯著升高(P<0.01)，提示造模成功。與模型組比較，黃根醇提物各劑量組大鼠血清中HA，LN，PCⅢ，CⅣ的含量明顯降低（P<0.01）。與高劑量組比較，中劑量組大鼠血清中LN的含量有顯著性差異（P<0.05），低劑量組大鼠血清中HA，PCⅢ的含量有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果提示：黃根醇提物能顯著對抗CCl4導(dǎo)致的肝纖維化大鼠血清中HA，LN，PCⅢ，CⅣ含量的升高，因此黃根醇提物能顯著抑制CCl4對肝組織的影響。表4  黃根醇提物對CCl4致肝纖維化大鼠血清HA，LN，PCⅢ，CⅣ的影響（略）

　　3.5  黃根醇提物對大鼠肝組織中SOD活性，MDA，GSH-Px水平的影響見表5。常規(guī)取出大鼠的肝組織，并用生理鹽水做成10%的肝勻漿，按照說明書的要求測試SOD（超氧化物歧化酶）的活性和MDA（丙二醛）、GSH-PX（谷胱甘肽過氧化物酶）的水平。與正常組比較，模型組大鼠肝組織中SOD活性、GSH-Px水平顯著降低（P<0.01），MDA水平顯著增加（P<0.01），提示造模成功。與模型組比較，黃根醇提物各劑量組大鼠肝組織中MDA的含量顯著降低（P<0.01），而肝組織中的SOD的活力和GSH-Px的水平顯著增強(qiáng)（P<0.01）。與黃根高劑量組比較，黃根低劑量組大鼠肝組織中的的MDA的水平有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)果提示，黃根醇提物能顯著對抗CCl4導(dǎo)致的肝臟纖維化大鼠肝組織中MDA的升高，同時能顯著對抗肝組織中SOD的活力和GSH-Px水平的降低。表5  黃根醇提物對CCl4致肝纖維化大鼠肝組織中SOD活性的影響和肝組織中MDA，GSH-Px水平的影響(略)

　　3.6  黃根醇提物對大鼠肝組織中Hyp的影響結(jié)果見表6。常規(guī)取出大鼠的肝組織，按照說明書的要求測試肝組織中Hyp（羥脯氨酸）的含量。與正常組比較，模型組大鼠肝臟Hyp含量顯著升高（P<0.01），提示造模成功。與模型組比較，黃根醇提物各劑量組大鼠肝組織中Hyp的含量明顯降低（P<0.01）。結(jié)果提示：黃根醇提物能顯著對抗CCl4導(dǎo)致的肝纖維化大鼠肝組織中Hyp含量的升高。表6  黃根醇提物對CCl4致肝纖維化大鼠肝臟組織Hyp含量的影響(略)

　　4  討論

　　肝纖維化形成機(jī)制極其復(fù)雜，中藥含有多種活性成分，可以發(fā)揮綜合作用，在抗肝纖維化方面體現(xiàn)出獨特優(yōu)勢。許多中藥諸如丹參、桃仁、蟲草菌絲、漢防己、姜黃等在臨床和實驗研究中已被證實具有較好的抗肝纖維化作用［6］。本實驗采用CCl4導(dǎo)致肝纖維化大鼠模型研究黃根醇提物對肝纖維化的影響。結(jié)果表明黃根醇提物可顯著抑制血清ALT,AST的升高，使ALB合成增加、A/G值升高，表示肝細(xì)胞再生和合成功能進(jìn)一步加強(qiáng)，說明黃根醇提物能明顯改善肝功能，具有抑制肝細(xì)胞、肝損傷的作用。血清HA，LN，PCⅢ和肝組織Hyp測定結(jié)果表明，黃根醇提物可以明顯抑制膠原纖維的增生，能抑制肝臟膠原纖維合成沉淀，具有抗肝纖維化的作用［7］。

　　CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化過程中，脂質(zhì)過氧化是其主要的肝損傷形成機(jī)制［8］。模型組大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA大量生成，SOD和GSH-Px活性受到明顯抑制。黃根醇提物能明顯降低肝纖維化大鼠肝組織中的MDA的水平和SOD，GSH-Px的活性，說明黃根醇提物能提高肝組織的抗氧化酶（SOD和GSH-Px）活性，抑制自由基的產(chǎn)生，促進(jìn)其清除，并能抑制氧自由基(OFR)引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng), 使丙二醛(MDA)生成減少，從而對肝組織起保護(hù)作用，使大鼠肝纖維化減輕，提示抗脂質(zhì)過氧化作用可能是其抗肝纖維化的作用機(jī)理之一。

　　迄今為止，國內(nèi)外對黃根各個方面的研究都很少，其仍處于待深入研究開發(fā)的狀態(tài)，且其現(xiàn)研究重點主要集中在矽肺的治療上，對其抗肝纖維化作用的研究很少有人涉及，因此本研究具有創(chuàng)新性，將為開發(fā)抗肝纖維化的新藥提供科學(xué)依據(jù)。

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2樓2011-07-20 14:12:59