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jyongchao木蟲 (正式寫手)
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[求助]
"6% polyacrylamide sequencing gel"是指什么樣的聚丙烯酰胺凝膠？
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| 如題，"6% polyacrylamide sequencing gel"是指什么樣的聚丙烯酰胺凝膠？與一般的聚丙烯酰胺凝膠凝膠有什么不同嗎？ |
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gwbk
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
jyongchao(金幣+2): 優(yōu)秀 2011-07-22 09:27:36
西瓜(金幣+5): Good！ 2011-07-22 12:18:47
jyongchao(金幣+2): 優(yōu)秀 2011-07-22 09:27:36
西瓜(金幣+5): Good！ 2011-07-22 12:18:47
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6%聚丙烯酰胺測序膠，現(xiàn)在都沒人配制這種膠了吧？ 1，蛋白質6%變性PAGE，配制中加入pH6.8的Tris，加了10%的SDS，電泳緩沖液Tris-gly-SDS。 2，非變性PAGE（Native-PAGE），跑DNA。電泳緩沖液TAE、TBE。 3，測序膠：在2的基礎上加入7mol/L的尿素。 4，上樣緩沖液也有所不同。 5，過硫酸銨和TEMED在DNA凝膠中濃度不隨聚丙烯酰胺濃度變化而變化。 |
2樓2011-07-22 02:01:20
gaoyang636
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5樓2011-07-22 12:23:18
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6樓2011-07-22 17:07:06
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以下資料供你參考： 1，加樣緩沖液： 98%去離子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青FF 0.025%溴酚藍 也有人用6*Loading Buffer的，可能會沉不下去，可以用注射器加樣。 2，超聲清洗超聲加玻璃棒攪拌，或者放微波爐里稍微加熱一下，尿素的溶解性很好的。實在有沉底，只能說明尿素不好使，可以用濾紙過濾。如果不放心可以用0.22um的過濾膜過濾。 3，非變性聚丙烯酰胺凝膠用于分離和純化雙鏈DNA片段，變性聚丙烯酰胺凝膠用于分離和純化單鏈DNA片段。DNA上樣前需要95℃變性2-5min。 4，變性膠電泳時需要高電壓、低電流、恒功率以保證條帶的分離。如果測序儀電泳的話，1500V~2000V（膠比較長），普通電泳100~200V，也可以放4℃，電壓調高一點。有資料恒定功率85W的。 |
8樓2011-07-22 22:34:34
jyongchao
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9樓2011-07-23 01:54:03
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10樓2012-11-26 16:23:40
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