| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 1578 | 回復(fù): 12 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖,點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
追尋風(fēng)輕揚金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
重疊延伸 ,為什么用連接后的片段作為模板卻擴不出來?
|
|
| 煩請各位幫幫忙 兩個外顯子 200bp 和1000bp的 重疊延伸pcr擴出1200的 膠回收后 用1200的作為模板 卻擴不出來了 而且還有一條250左右的片段 為什么啊 ?問題可能出在哪兒呢? |

金蟲 (小有名氣)

榮譽版主 (知名作家)
|
PCR擴不出來,可以降低退火溫度試試。 不過如果用原來擴增200bp和1000bp的引物來擴1200bp的引物,一般比較難,原理我不記得了。 我們一般這樣子做:當(dāng)初擴你那兩個片段的時候(姑且稱為A片段和B片段,A在左B在右),A的左端和B的右端額外多擴幾個到幾十個堿基;另外再設(shè)計一對嵌套引物,位點就在你需要的A的左端和B的右端,用它來擴增融合產(chǎn)物,得到你真正需要的產(chǎn)物。一句話,就是融合時使得融合產(chǎn)物比想要的產(chǎn)物長一點,之后再用一對新的引物把目的產(chǎn)物P出來。 |
金蟲 (小有名氣)


| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +3 | 王大坦1 2026-03-23 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +8 | 上岸6666@ 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | 孅華 2026-03-22 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩0703總分337求調(diào)劑 +4 | niko- 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +5 | 我愛生物生物愛?/a> 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
[考研] 生物學(xué)一志愿985,分?jǐn)?shù)349求調(diào)劑 +4 | zxts12 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
[考研] 材料學(xué)碩301分求調(diào)劑 +7 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | @taotao 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
[考研] 材料學(xué)學(xué)碩080502 337求調(diào)劑-一志愿華中科技大學(xué) +4 | 順順順mr 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級已過 本科山東雙非 求調(diào)劑! +3 | 不想理你 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
[考研] 一志愿重慶大學(xué)085700資源與環(huán)境專碩,總分308求調(diào)劑 +3 | 墨墨漠 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
[考研] 一志愿蘇州大學(xué)材料求調(diào)劑,總分315(英一) +5 | sbdksD 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
[考研] 材料學(xué)碩297已過四六級求調(diào)劑推薦 +11 | adaie 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +11 | Ymlll 2026-03-18 | 15/750 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +5 | pupcoco 2026-03-17 | 8/400 |
|