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[求助]
動(dòng)物細(xì)胞蛋白提取含量低
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| 這兩天提了兩次蛋白但是含量都很低， 師兄過年那段時(shí)間提的有最高的有80ug/ml，可是這兩天我用了同樣的藥品和方法 提出來只有20多，細(xì)胞密度挺高的不知為何。會(huì)不會(huì)與離心溫度有關(guān) ，我們實(shí)驗(yàn)室用冷凍離心機(jī)的人少，那臺(tái)機(jī)子長期沒人修，我也是才去，沒辦法就用了常溫 。 |
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4樓2011-07-26 07:09:49
2樓2011-07-25 09:31:54
3樓2011-07-25 11:45:15
terry130
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 4
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- 專業(yè): 細(xì)胞死亡
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
Illfxy(金幣+3): 謝謝回復(fù)，謝謝你給出的方法，我會(huì)去試試的，buffer可能有問題，最近幾天幾個(gè)學(xué)弟提的量也很低 2011-07-26 10:22:11
lstt09nk(金幣+5): 感謝交流 2011-07-26 10:34:29
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-07-26 10:34:43
Illfxy(金幣+3): 謝謝回復(fù)，謝謝你給出的方法，我會(huì)去試試的，buffer可能有問題，最近幾天幾個(gè)學(xué)弟提的量也很低 2011-07-26 10:22:11
lstt09nk(金幣+5): 感謝交流 2011-07-26 10:34:29
lstt09nk(BioEPI+1): 2011-07-26 10:34:43
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離心溫度和轉(zhuǎn)速對(duì)濃度的影響并不大，在這種實(shí)驗(yàn)中蛋白酶的殺傷作用并沒有你想象中那么大，只在長期保存時(shí)才需要注意蛋白酶的抑制問題。 你師兄80ug/ml的提取濃度對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞而言是相當(dāng)?shù)偷牧�，正常的話�?ug/ul左右，所以他的buffer本身可能就有問題，用這樣的buffer你得到更低的效果也就可以理解了。建議你上網(wǎng)重新找一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的buffer配方，推薦你用RIPAbuffer，懶得配的話可以直接去santa cruz 公司買�；蛘吒唵蔚姆椒ㄊ侵苯佑肧DS-PAGE 的上樣buffer去裂解，超聲再煮一下就好，核酸不多的話連離心都可以省了，缺點(diǎn)就是不能測(cè)蛋白濃度。 |
5樓2011-07-26 10:04:15
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