 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1436 | 回復: 8 | ||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 博學EPI ，點擊這里進行查看 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
wuweibewin金蟲 (正式寫手)
|
[求助]
PCR有關問題
|
|
|
本人從師姐那里獲得了一對引物，用于棉花基因組中某個外源基因的檢測。我用這個引物也用了有兩年了吧，一直雖然有雜帶，但是可以找到清晰的目的帶。 結果不知道為何，從今年六月份開始，不知怎么回事，這天引物突然失靈了一般，不論怎么試，除了質粒有帶，其余株系都沒有帶，連非特異性帶都沒有！（聲明失靈的前一晚上我還做出來了，第二天突然就不知怎么回事就P不出來了）！然后我在以前的條件下（退火溫度和體系相同），做了至少20多次，結果全部一樣，各株系均沒帶（正常下陰性也有大量非特異擴增）！ 于是我 首先利用其它基因的引物對這一批DNA進行擴增，發(fā)現(xiàn)能夠擴增出來；同時我又提取了一些新的樣品，結果仍然一樣——我覺得可以證明DNA樣品問題不大！ 然后我讓我?guī)熋煤屯瑢W替我做了幾次，結果和我做的一樣，我PCR操作至少也做了百八十批了！---操作應該沒有問題 PCR儀使用的是EPPENDOF和thermo的，用于擴增其他基因都沒有問題————排除PCR故障 引物我前后利用華大和博尚合成了三四批，均得到同樣結果，引物序列均能在基因序列上找到，且與之前報告單序列完全一樣 我同時利用PCR儀進行了多次溫度梯度PCR，結果所有溫度梯度結果也都是一樣！ taq酶利用TAKARA和北京全是金結果基本一致，且換用多個批次的taq酶！沒有結果！同時taq酶對其他基因的擴增良好！ PCR的體系完全根據(jù)taq酶說明書進行！也曾經(jīng)嘗試過TAQ的濃度梯度/dntp濃度梯度/MG離子梯度，無果！ 這個問題讓人很是頭疼！ 異常發(fā)現(xiàn)：發(fā)現(xiàn)凝膠電泳的500bp一下，呈涂抹狀，我認為是大量引物沒有反應導致的引物二聚體，但或許有其他原因！ 我為此已經(jīng)進行了90多輪PCR，換了400多個樣品（十批）！ 還請各位高手批評指正�。�！不勝感激��！ 之前的結果 現(xiàn)在結果 部分批次模板電泳 mg離子梯度 溫度梯度 Dntp梯度 taq梯度 模板濃度梯度 [ Last edited by wuweibewin on 2011-7-24 at 22:25 ] |
回復此樓» 猜你喜歡
311（085601）求調劑
已經(jīng)有4人回復
-
305求調劑
已經(jīng)有4人回復
-
一志愿北化085600材料專碩275|有文章專利｜求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調劑
已經(jīng)有12人回復
-
289求調劑
已經(jīng)有11人回復
-
食品工程專碩一志愿中海洋309求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
生物學學碩，一志愿湖南大學，初試成績338
已經(jīng)有6人回復
-
321求調劑
已經(jīng)有7人回復
-
343求調劑
已經(jīng)有4人回復
-
本科新能源科學與工程，一志愿華理能動285求調劑
已經(jīng)有6人回復
wuweibewin
金蟲 (正式寫手)
- 博學EPI: 14
- 應助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 673.3
- 散金: 195
- 紅花: 8
- 帖子: 634
- 在線: 42.8小時
- 蟲號: 738179
- 注冊: 2009-04-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
3樓2011-07-25 14:08:16
2樓2011-07-24 22:46:38
4樓2011-07-25 14:25:09
wuweibewin
金蟲 (正式寫手)
- 博學EPI: 14
- 應助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 673.3
- 散金: 195
- 紅花: 8
- 帖子: 634
- 在線: 42.8小時
- 蟲號: 738179
- 注冊: 2009-04-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 作物分子育種
5樓2011-07-25 21:45:51
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 學碩274求調劑 +8 | Li李魚 2026-03-26 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703本科鄭州大學求調劑 +3 | nhj_ 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 339求調劑，想調回江蘇 +6 | 烤麥芽 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 292求調劑 +14 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-25 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 086000調劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海理工能源動力（085800）310分求調劑 +3 | zhangmingc 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856調劑 +5 | 求求讓我有書讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08開頭275求調劑 +4 | 拉誰不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿211，335分，0856，求調劑院校和導師 +4 | 傾____蕭 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 359求調劑 +4 | 王了個楠 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調劑 +7 | 蛋黃咸肉粽 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿河工大 081700 276求調劑 +4 | 地球繞著太陽轉 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學調劑一志愿上海交通大學336分-本科上海211 +4 | 小魚愛有機 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調劑 324 +4 | Promise-jyl 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 292求調劑 +4 | 鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調劑一志愿武漢理工大學材料工程（085601） +5 | WW.' 2026-03-23 | 7/350 |
|