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lanhuaorchid金蟲 (著名寫手)
orchid
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[求助]
有人做關(guān)于多重PCR方面的東西嗎
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| 有人在做關(guān)于多重PCR的東西嗎，請(qǐng)給一些指導(dǎo)和建議，尤其是在特異性引物的尋找上，是自己設(shè)計(jì)嗎，謝謝 |
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【答案】應(yīng)助回帖
lanhuaorchid(金幣+1): 謝謝啦 2011-07-26 20:23:56
| 我做過一點(diǎn)這方面的。個(gè)人認(rèn)為引物的設(shè)計(jì)跟普通的沒什么差別，主要是幾條引物之間TM值不能差別太大，不能有互補(bǔ)序列，如果擔(dān)心引物特異性可以BLAST一下。從我做的多重PCR來看，最難的還是在體系和條件的摸索。正常來說引物確定之后條件也就定了，但是對(duì)于多重PCR常常出現(xiàn)你意想不到問題。在條件的摸索上我建議你 一對(duì)一對(duì)引物做梯度，然后根據(jù)每對(duì)引物的條件取舍。開始摸索的時(shí)候千萬不要吝嗇內(nèi)點(diǎn)taq，用大體系的來做，小體系的不穩(wěn)定，耽誤了我不少事。 |
2樓2011-07-25 21:00:01
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