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[求助]
求助用超聲波破碎細(xì)胞
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| 用超聲波破碎細(xì)胞為何會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，那是細(xì)胞團(tuán)嗎？要超聲多久才會(huì)使得這種現(xiàn)象消失，溶液變澄清？ |
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3樓2011-07-26 14:39:49
海綿控
新蟲 (初入文壇)
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2樓2011-07-26 10:48:43
nicole1124
新蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
fanger(金幣+1): 2011-07-26 19:02:26
fanger(金幣+1): 這個(gè)我都很清楚，我搞的是腫瘤細(xì)胞或動(dòng)物細(xì)胞，白色沉淀是如何產(chǎn)生的？不是用生理鹽水收集細(xì)胞再超聲的嗎？各位大俠，求詳解，關(guān)鍵的，急！實(shí)驗(yàn)迫在眉睫！ 2011-07-26 19:08:17
dhd997(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-07-26 20:52:09
fanger(金幣+1): 2011-07-26 19:02:26
fanger(金幣+1): 這個(gè)我都很清楚，我搞的是腫瘤細(xì)胞或動(dòng)物細(xì)胞，白色沉淀是如何產(chǎn)生的？不是用生理鹽水收集細(xì)胞再超聲的嗎？各位大俠，求詳解，關(guān)鍵的，急！實(shí)驗(yàn)迫在眉睫！ 2011-07-26 19:08:17
dhd997(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-07-26 20:52:09
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是超什么細(xì)胞？大腸桿菌還是293T之類的細(xì)胞？超聲的時(shí)間和樣品的多少和體積有關(guān)，一般來說，如果是純化蛋白超聲大腸桿菌，800ML培養(yǎng)基收集的菌，我用的是400-600W，超三秒，停15秒一個(gè)循環(huán)，超半個(gè)小時(shí)左右，記得一定要加蛋白酶抑制劑，冰水浴。 如果是細(xì)胞，一個(gè)10cm的培養(yǎng)皿收集下來的細(xì)胞，用200W，超兩秒，停10秒，只用超10個(gè)循環(huán)左右就足夠了，蛋白酶抑制劑可加可不加，因?yàn)榧恿藭?huì)改變樣品組成，而且如果一直保持在冰上操作，基本不會(huì)有什么降解。 你的樣品是超聲之后才出現(xiàn)白色沉淀的嗎？很有可能是蛋白變性后形成的聚集體，超聲過程要注意冰水浴，工作時(shí)間盡量短，間隔時(shí)間長，讓樣品有足夠的時(shí)間冷卻，超聲的產(chǎn)熱是很厲害的。 |
4樓2011-07-26 16:51:41
loveskyzhou
鐵蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
fanger(金幣+1): 超聲的是動(dòng)物細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞，非細(xì)菌！！如何解決這種情況��！ 2011-07-26 19:06:22
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白色沉淀是不是蛋白沉了啊，BUFFER離子濃度會(huì)不會(huì)太低，超聲方法樓上就好 |
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loveskyzhou5樓2011-07-26 18:29:06
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