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suixing1956新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助全基因合成
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| 打算找公司合成一段1100個(gè)堿基的DNA序列，有啟動(dòng)子和終止子。想要在序列兩端引入Bind HI和XhoI，該如何設(shè)計(jì)？是直接在序列兩端引入酶切位點(diǎn)嗎？懇請(qǐng)賜教！ |
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gwbk
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 一并獎(jiǎng)勵(lì) 2011-08-01 08:19:32
suixing1956(金幣+2): 了解了，非常感謝。 2011-08-01 08:47:10
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 一并獎(jiǎng)勵(lì) 2011-08-01 08:19:32
suixing1956(金幣+2): 了解了，非常感謝。 2011-08-01 08:47:10
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2樓的牛人說(shuō)的不錯(cuò)滴~我補(bǔ)充一下，嘿嘿 我在生工合成，3塊錢1個(gè)堿基。合成完了才聽(tīng)說(shuō)捷瑞2塊7一個(gè)堿基，  。1，二樓說(shuō)的很有道理，如果是pET載體表達(dá)的話，可以沒(méi)有起始終止密碼子，但是必須注意加酶切位點(diǎn)有沒(méi)有移碼突變。還有一種情況是載體本身沒(méi)有起始密碼子的表達(dá)載體，這時(shí)需要加上的。 2，直接在設(shè)計(jì)基因兩端加酶切序列。這個(gè)生工的服務(wù)還是可以的，開(kāi)始合成基因的時(shí)候，我沒(méi)有加起始終止密碼子和酶切位點(diǎn)的，打算合成一些帶酶切位點(diǎn)和起始終止密碼子的引物，PCR后切膠回收~生工的孔繁靜（Refuse AD，人確實(shí)很耐心）提示我是不是加上酶切位點(diǎn)和起始終止密碼子，到時(shí)候直接提質(zhì)粒酶切就可以了~~考慮雖然加上十幾個(gè)堿基貴點(diǎn)，但是后面操作省了很多，值了，如果后面免不了用特異性引物PCR驗(yàn)證，也可以用引物的方式加進(jìn)去酶切位點(diǎn)序列和起始終止密碼子，引物合成有公司一塊錢一個(gè)堿基，提供4OD的量，哈哈，競(jìng)爭(zhēng)吧，呵呵。 3，值得提醒的是，合成基因做表達(dá)的話，基因序列可以免費(fèi)到公司做密碼子優(yōu)化設(shè)計(jì)的。優(yōu)化后，看看基因內(nèi)部有沒(méi)有酶切位點(diǎn)，這個(gè)有木有基因合成公司會(huì)提醒你的。 4，合成時(shí)間，很快，我的10天左右就可以拿到3條基因~ |
3樓2011-07-31 22:24:08
lxj341401
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4樓2011-08-01 00:35:45
5樓2011-08-01 07:48:23
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