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yixindejia新蟲 (初入文壇)
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[求助]
時間分辨熒光分析
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請教各位高手，有沒有做過時間分辨熒光分析的詳細步驟和注意事項，越詳細越好，謝謝啦!（主要是儀器操作） [ Last edited by yixindejia on 2011-8-11 at 22:39 ] |
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2樓2011-08-12 00:15:55
qingwa59
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【答案】應助回帖
yixindejia(金幣+20, 博學EPI+1): 熒 光 光 譜 儀(HITACHI F-4500 Fluorescence spectrophotometer)的儀器操作有嗎 2011-08-12 14:05:05
3樓2011-08-12 00:17:37
qingwa59
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我在網(wǎng)上找來的，你看看能不能用 一〉 開機順序： （1）開機前首先確認主機兩個開關：POWER/MAIN均處于關閉狀態(tài)（搬向O處）。先接（2）通電源開關（POWER），5秒鐘后再按下氙燈點燈按鈕，當氙燈點燃后 （3）再接通主開關（MAIN）。此時主開關上方綠色指示燈連續(xù)閃動三下。, v＊ L; （4）接通電腦及打印機電源，Win98開始建立，隨后F-4500操作界面自動進入。 （5）按界面提示選擇操作方式。 〈二〉 關機順序： （1）逆開機順序實施操作。 （2）當電源開關關閉后5秒鐘，再次接通10分鐘.目的是僅讓風扇工作，使燈室散熱）最后關閉電源開關。 〈三〉 操作界面介紹：# G& t; i$ ?! v0 V- s- s8 ^ （1）當前顯示的畫面為模擬畫面，即觀測樣品峰用。. j! x'' |7 M0 u! X! ]: |# L （2）在模擬畫面右側，是儀器當前狀態(tài)顯示。它給出了當前的信號能量值，激發(fā)和發(fā)射波長及狹縫值，光閘（Shutter）開/關狀態(tài)等。# p V O0 w5 e1 v （3）顯示屏最上一行為八個菜單桿，分別為 File /Edit /View /Spectrophotometer /Tools /Utility /Window /Help。每個菜單桿下均有子目錄，供用戶選用。! ] r8 q/ r. w9 p1 |, } （4）為了方便用戶操作，將常用的子目錄演變?yōu)?23 個帶彩圖的快捷工具欄，用戶隨意點擊后，操作界面立即更換，非常便利。該 23 個快捷欄分布在顯示屏的上方及右方，非常醒目。4 |＊ z& y# ?9 E4 k0 ] 〈四〉 波長掃描的簡易操作：（Wavelength Scan）& ^" ]$ M: e+ k2 J$ w- I7 v 點擊快捷欄“Method” 后，立即顯示了分析方法（Analysis Method）的五個重疊界面分別為 “常規(guī)”（General）， “儀器條件”（Instrument）， “模擬畫面”Monitor， “處理”Processing， “報告”Report。 下面詳細介紹每個界面： （1）General （常規(guī)） ＊Measurement （測量方式）－－－－－－－－ 選擇Wavelength （波長掃描） ＊Operator （操作者名）－－－－－－－－-鍵入人名 ＊Instrument 儀器型號 －－－－－－－－－－自動給出 Q t- q" T0 _4 ^ ＊Sampling 樣品名稱 －－－－－－－－－－ ＊Comments 注釋表－－－－－－－－－－－－－－可輸入簡單說明 ＊Load 裝載 －－－－－－－－－－－－－－－－調用已存入的條件 ＊Save 存入－－－－－－－－－－－－－－－－-存儲現(xiàn)有的條件 ＊Save As （另存）－－－－－－－－－－－－－－ 另存現(xiàn)有的條件 （2）Instrument （儀器條件） ＊Scan mode 掃描方式 －－－－－－－－－－ Excitation 激發(fā)波長掃描, y4 J H4 z! T8 T/ r9 | Emission （發(fā)射波長掃描） E4 u; W- K: c4 n. g'' K Synchronous （同步掃描） ＊Data mode （數(shù)據(jù)方式）－－－－－－－－-Fluorescence （熒光采集） ,; Luminescence （發(fā)光采集） Phosphorescence（磷光采集） ＊EM WL （發(fā)射波長）－－－－－－－－-輸入范圍 200nm―900nm ＊EX Start WL （激發(fā)起始波長）－－－－ 輸入范圍 200nm—890nm6 J- o1 ?9 Y8 J9 B+ N: c ＊EX End WL （激發(fā)終止波長）－－－－-輸入范圍 210nm—900nm ＊EX WL 激發(fā)波長－－－－－－－－－－－－-輸入范圍 200nm—900nm ＊EM Start WL （發(fā)射起始波長）－－－－-輸入范圍 200nm—890nm- _5 |1 ` l7 G7 X/ }5 D/ ＊EM End WL （發(fā)射終止波長）－－－－-輸入范圍 210nm―900nm$ J M0 S1 }% P, F. _5 ~ ＊Scan speed （掃描速度）－－－－－－－－－－-15,60,300,1200,2400,12000,30000nm/min 六擋可選（磷光掃描：15,60,240nm/min） ＊Delay （延遲時間）－－－－－－－－－－－－輸入范圍 0¬―99秒（啟動后延遲測量） ＊EX Slit （激發(fā)單元狹縫）－－－－－－-1.0, 2.5 ,5.0, 10.0, 20.0五擋可選。6 } Y3 ＊EM Slit （發(fā)射單元狹縫）－－－－－－-1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 20.0五擋可選。 ＊PMT Voltage （光電管負高壓）－－－－－－-400V, 700V, 950V三擋可選。（一般選擇700V） ＊Response （響應速度）－－－－－－－－－－－－0.0004,0.01,0.05,0.1,0.5,2.0,8.0秒Auto八擋可選。速度快峰形分辨率高，但噪音大。速度慢反之。 ＊Corrected spectra （光譜校正）－－－－－－－－- 選定后則可使用已校正的光譜函數(shù)。 ＊Shutter control （光閘控制）－－－－－－－－選擇控制狀態(tài)，樣品待測或重復掃描時激發(fā)光不能照射到樣品上,避免產生化學變化。" l8 J8 S, ＊Replicates （重復次數(shù)）－－－－－－－－－－-可在1―99之間選擇。（重復掃描用） ＊Cycle time （循環(huán)周期）－－－－－－－－－－-可在0―180分間選擇。（重復掃描用） （3）Monitor （模擬監(jiān)視）'' O+ f ^+ @ l Y; p ＊Y-Axis Max （縱軸標尺上限值）－－－－ 一般樣品預掃描后儀器自動賦值。 ＊Y-Axis Min （縱軸標尺下限值）－－－－- 根據(jù)需要賦值。 Open data processing window£＊ after data acquisition（測量后打開數(shù)據(jù)處理窗口） 。測定結果可自動存儲，便于后期處理。R一般選定 ＊Print report after data acquisition （數(shù)據(jù)采集后自動打印）－－- 一般不選定。 ＊Overlay（重疊光譜圖）－－－－-可將光譜圖重疊在監(jiān)視畫面上但重復掃描不可設定。 C （4）Processing （處理方法） 簡介：此界面主要是對已測定的圖譜根據(jù)用戶的要求進行選擇處理。; CAT平均化）－－－－－－－－ 如選定則對重復測定的圖譜進行平均處理。£＊+ n; ?5 Q6 ]5 f4 ＊Processing choices （處理方法的選擇）－－－－- 有如下四種處理方法：0 y1 ~! M7 `2 _,~ 1 Savitsky-Golay Smooth （ ）2 f, P& Y5 ?% y 2） Mean Smooth 平均平滑 3 Median Smooth（中間平滑）. s6 Y B% q% \" x k5 C 4） Derivative （微分求導） ＊Processing steps （處理順）－－－－－－－－－－% K% H7 M; S5 j. ^: p G'' o ＊Peak Finding 峰檢出 －－－－－－－－－－- 有如下三項內容： 1）Integration method （檢出方法）－－－－- a Rectangnlar 矩形 b Trapezoid （斜方形） c Romberg （羅伯格形） k" p" M" F5 B+ 2）Threshold （閾值）－－－－－－－－－－決定信號峰的舍取。賦值范圍0.001-1000。小于賦值的峰不打印結果。 3）Sensitivity （靈敏度）－－－－－－ 可改變放大器的放大倍數(shù)。一般設置為“1”。 4）Report 報告格式; J9 H6 Q- u0 M3 A; l2 g. W ＊Output （輸出）－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－有如下三種格式可選： 1）Print Report －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－- 打印報告（常用格式）7 N x2 Y b% B \ } 2）Use Microsoft Excel －－－－－－－－－－－－將數(shù)據(jù)變換為微軟Excel 格式。 3）Use print generator sheet－－－－－－ 利用變換器（附選件）打印圖表。 ＊Pientation （方位）－－－－－－－－－－－－－－－－ ＊Pintable items （打印選項）－－－－－－ 有五種項目可選：! S C# U c'' e# o 1）Include data （打印數(shù)據(jù)） 2）Include method （打印方法） 3）Include graph （打印圖譜）$ ?1 u+ Q! f. V! q" g 4）Include data listing （打印數(shù)據(jù)表）! V- ` x u/ p7 Y 5）Include peak table 打印峰值表 ＊Printer Font 打印機字形－－－－－－－－- 可改變報告的打印字形。 〈五〉時間掃描的簡單操作：（Time Scan） 0 u S8 |5 {/ E ~9 K 簡介：此掃描方式是EX,EM的波長均固定，僅觀察樣品隨時間的變化。模擬畫面的橫坐標軸為時間單位。進入方法與波長掃描相同。 w: h＊ K7 E& t'' e b$ Y u （1）General 常規(guī) ＊Measurement 測量方式－－－－－－－－選擇 Time Scan 時間掃描 （其它內容與波長掃描相同，故從略。 （2）Instrument （儀器條件） ＊Data mode 數(shù)據(jù)方式－－－－-Fluorescence （熒光采集） Luminescence （發(fā)光采集） Phosphorescence磷光采集 ＊EX WL （激發(fā)波長）－－－－－－ 0nm,200nm—900nm 設定y ＊EM WL （發(fā)射波長）－－－－－－ 0nm,200nm—900nm 設定＊ ＊Time unit （時間單位）－－－－－－ s,ms 兩種單位可設定 ＊Scan time （掃描周期）－－－－－－ 10–3600s,1000–9999ms范圍設定 （其它內容與波長掃描相同，故從略。） （3）Monitor 模擬監(jiān)視 ＊Y-Axis （縱軸上下限值）－－－－- 一般樣品預掃描后儀器自動賦值. ＊X-Axis （橫軸上下限值）－－－－－－時間軸， 根據(jù)需要設定. （其它內容與波長掃描相同，故從略。） （4）Processing （處理方法）－－－－- 內容與波長掃描相同，從略 （5）Report （報告格式）－－－－- 內容與波長掃描相同，從略" J, u3 L/ |7 I1 y8 P 〈六〉光度計法的簡單操作: PHOTOMETRY# m0 ` R+ Q5 a- X 簡介：光度計法亦稱濃度直讀法，也稱工作曲線法。利用配制的具有梯度的標準樣品，先做出一條標準曲線，然后再反測未知樣品。 N5 O: H" v L9 } （1）General 常規(guī)'' { X7 R1 ?3 ]4 c+ Q- m! \ ＊Measurement 測量方式－－－－－－-選擇 Photometry（光度計） （其它內容與波長掃描相同，故從略。） （2）Quantitation 定量條件+ |+ r＊ L9 V6 W$ N N ＊Quantitation type （測量類型）－－－－－－ 1 Wavelength 指定波長 2 Peak area （峰面 積） 3）Peak height 峰 高'' Z i0 I; e5 L'' w'' P 4）Derivative （導 數(shù)） 5）Ratio （比 率）" t6 @7 J'' y/ d1 C5 W ＊Calibration type 曲線校正類型－－－－－－－－ 1）None （沒 有） 2 1 st order（線性方程） 3 2 nd order（二次方程） 4）3 rd order（三次方程）9 W: G. F$ G, v 5）Segmented （折 線） ＊Num ber of wavelengths 波長數(shù)－－－－－－ 當曲線校正選擇“None” 時波長數(shù)可以在1－6間選擇。其他校正類型只能在1－3間選擇，但此時的波長數(shù)并不表示在若干波長值下可以同時測定樣品的濃度，僅僅是對信號峰的一種處理方法。 ＊Concentration unit 濃度單位－－－－－－－－－－ 根據(jù)需要格式設定7 v1 a1 C5 w1 ?; o ＊Manual calibration（手動校正）－－－－－－ 根據(jù)公式校正1 h9 b; k9 y# D; p/ [" s ＊Force curve through zero 強制曲線歸零7 [, m'' |1 W a e. w ＊Digit after decimal point （小數(shù)有效位）－－-可以在1－3間賦值 （3） Instrument 儀器條件 ＊Data mode 數(shù)據(jù)方式－－－－－－－－－－- Fluorescence （熒光采集）! k＊ _/ I% X3G Luminescence （發(fā)光采集） Phosphorescence（磷光采集）7 f0 D2 u4 q# ] ＊Wavelength mode （波長方式）－－－－- EX WL Fixed（激發(fā)波長固定） EM WL Fixed（發(fā)射波長固定） Both WL Fixed（兩側均固定） ＊Fixed WL （波長選定）－－－－－－－－- 可以選定1–6個波長值，波長值賦值范圍0nm,200—900nm。 ＊EX Slit （激發(fā)單元狹縫）－－－－- 設定范圍2.5,5.0,10.0,20.0nm ＊EM Slit （發(fā)射單元狹縫）－－－－- 設定范圍2.5,5.0,10.0,20.0nm ＊PMT Voltage 光電管高壓－－－－－－- 設定范圍 400V,700V,950V8 D8 I4 Y1 K- W$ y8 u'' ＊Auto statistic cal.number （自動統(tǒng)計計算）－－－－可以進行平均值，標準偏差，變異系數(shù)的計算。為此目的則要設置樣品重復個數(shù)，此數(shù)在2-4000間選擇。 ＊Replicates （重復次數(shù)）－－－－－－ 重復測量次數(shù)，輸入范圍1-20。& o/ [＊ e E, ? ＊Integration Time （積分時間）－－－－- 0.1–10.0秒間設定。, U+ P: `7 `# b" J T ＊Delay （延遲時間）－－－－－－-啟動后經(jīng)過所設定的時間自動開始測量。 （4）Standards 標準樣品表 ＊Number of Samples （標準樣品數(shù)目的設定）－－－－－－ 1—20間設定。: p9 c5 P＊ r+ ＊Update 修定確認－－－－－－－－－－ 當標樣數(shù)確定后，點擊此框后顯示標樣表以供賦值。 ＊Insert 插 入－－－－－－－－－－ 點擊此框可臨時插入一個標樣條目。 ＊Delete 刪 除－－－－－－－－- 點擊此框可臨時刪除一個標樣條目。; d （5）Monitor 模擬監(jiān)視 同前述相同，故從略。% t5 h {4 b1 q: w& u9 T: ?& a （6）Report 報告形式 同前述相同，故從略。 注：標樣測量點擊Measure框，未知樣品測量點擊F4鍵，結束測量點擊F9鍵。 〈七〉三維掃描的簡易操作 3-D SCAN 說明：該功能的作用是，當某個樣品不知最佳激發(fā)波長和最佳發(fā)射波長時，利用該功能 可自動快速地給出最佳條件。并可供其他特殊分析用。2 A2 C a2 Z＊ \4 G& f& e/ 1）General 常規(guī) ＊Measurement 測量方式－－－－－－－－－－選擇 3—D Scan 方式。6 Y1 y3 b- a1 q5 a, B; 2 Instrument 儀器條件 ＊Data mode 數(shù)據(jù)方式－－－－－－－－可選擇Fluorescence熒光或Phosphorescence磷光。 ＊EX Start WL 激發(fā)起始波長－－－－－－－－- 0nm,200nm—850nm間選擇。 ＊EX end WL 激發(fā)終止波長－－－－－－－－－－-0nm,200nm—900nm間選擇。 ＊EX Sampling interval 激發(fā)掃描間距－－－－- 1—50nm間選擇。 ＊EM Start WL 發(fā)射起始波長－－－－－－－－ 0nm,200nm—850nm間選擇。 ＊EM end WL 發(fā)射終止波長－－－－－－－－- 0nm,200nm—900nm間選擇。 ＊EM Sampling interval 發(fā)射掃描間距－－－－ 1—10nm間選擇。 ＊Scan speed 掃描速度－－－－－－－－ 任選。如為了快速，可選30000nm/分。 （3） Monitor 模擬監(jiān)視 從略。 （4） Processing 數(shù)據(jù)處理 從略。 （5） Report （報告） 從略。 |
4樓2011-08-12 16:58:25
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