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[求助]
救命啊~~~~~~~關(guān)于 Human Park2 gene 和 TOPO vector
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這段時間遇到的實驗問題實在非常頭痛，請教大家一些問題，謝謝！ 實驗?zāi)康模合氚袶uman Park2基因克隆到 TOPO vector中。 實驗流程：PCR擴增Human Park2基因——克隆PCR產(chǎn)物到TOPO vector中——轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5a中——質(zhì)粒提取，酶切檢測——測序 遇到問題：1.用pfu Turbo 酶PCR擴增不出Park2 基因， 后來在 Expand Long Template PCR 系統(tǒng)中可PCR擴增基因。 2. Expand Long Template PCR 系統(tǒng)擴增出基因很難克隆到 TOPO vector中。（轉(zhuǎn)化效率其差，測序發(fā)現(xiàn)其中有錯配堿基） 3. 以Expand Long Template PCR 擴增產(chǎn)物為模板，用pfu Turbo 酶擴增Park2 基因，轉(zhuǎn)化后酶切檢測后發(fā)現(xiàn) 質(zhì)粒都是空的。（似乎一些引物的二聚體被克隆到質(zhì)粒中了） 各位高人給點意見吧，有沒有哪個實驗做PARK2基因的，要不借點用用吧？ 救命啊~~~~~ |
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