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mengxibio新蟲 (小有名氣)
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[交流]
DH5a搖菌的OD值問題 已有10人參與
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| 用DH5a制作感受態(tài)細(xì)胞，用OD值檢測(cè)是否到達(dá)對(duì)數(shù)期，OD值多少合適？ |
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5樓2011-08-31 17:22:01
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
amisking(金幣+4): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-08-31 20:07:26
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amisking(金幣+4): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-08-31 20:07:26
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這個(gè)跟以下幾個(gè)因素有關(guān) 1.培養(yǎng)基成份 2.搖瓶形狀 3.搖床轉(zhuǎn)速 以LB培養(yǎng)基、普通三角搖瓶、250rpm轉(zhuǎn)速為例，A600 1.2以下時(shí)菌體都處于對(duì)數(shù)生長期； 影響菌體快速生長的因素主要有以下幾個(gè)方面 1.營養(yǎng) 2.溶氧 3.代謝廢物 LB培養(yǎng)基可以支持DH5a長到A600在5左右，在搖瓶水平上不會(huì)出現(xiàn)代謝物抑制，因此使菌體退出對(duì)數(shù)生長期的因素只有溶氧不足這一個(gè) |
6樓2011-08-31 19:05:52
7樓2011-08-31 20:07:09
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8樓2011-08-31 21:46:54
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+5): 最近很活躍啊，加大獎(jiǎng)勵(lì) 2011-09-01 06:59:58
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dhd997(金幣+5): 最近很活躍啊，加大獎(jiǎng)勵(lì) 2011-09-01 06:59:58
| 100ML的LB肉湯，在1000ML的錐形瓶搖，OD600是0.4 左右，因?yàn)樽龈惺軕B(tài)的OD值最好控制在0.6以下。而在冰浴的過程中，操作的過程中，細(xì)菌還會(huì)長，并且這個(gè)時(shí)候正好處于對(duì)數(shù)生長期，細(xì)菌生長特別快，所以O(shè)D為0.4左右的時(shí)候就開始準(zhǔn)備做，這樣的感受態(tài)比較好。搖菌的時(shí)候一定要用大一點(diǎn)的錐形瓶，這樣營養(yǎng)比較均勻，有利于菌體的生長 |
9樓2011-08-31 21:59:43
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+3): Good 2011-09-01 18:10:27
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+3): Good 2011-09-01 18:10:27
| 由于未明原因，在大腸桿菌的生長曲線上有兩個(gè)時(shí)期的大腸桿菌可以有較高的轉(zhuǎn)化效率，一個(gè)是在出去（OD600=0.4）（Hunahan 1983），另一個(gè)在末期（OD600=0.95）（Tang et al. 1994）。前期收獲的菌容易有效是因?yàn)樗母咿D(zhuǎn)化率能持續(xù)時(shí)間更長，而后期的生長峰較陡峭，在收集細(xì)菌時(shí)若耽誤2-3min，將會(huì)使轉(zhuǎn)化效率較低一個(gè)數(shù)量級(jí)�！肿涌寺�(shí)驗(yàn)指南第三版第90頁。 |
10樓2011-09-01 09:32:41
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