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wanghd2826

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 關(guān)于改良CTAB法提取RNA的問(wèn)題~~

哪位蟲(chóng)友用過(guò)改良的CTAB法提取過(guò)RNA啊，我加Licl沉降RNA的時(shí)候?yàn)槭裁磿?huì)分層呢。。。方便交流，把步驟貼出來(lái)：
1、取 1 . 5 mL的 Eppendo rf離心管,分別加入 500 uL
的 2 XCTAB液, 再分別加入少量 PVP40( 0 . 5~ 1 . 0m g ),振蕩
混勻。
2、分別取 0 . 4~ 0 . 5 g材料于研缽中, 液氮研磨,然后將研
磨粉末加入離心管中, 混勻并標(biāo)記。
3、離心管于 65度水浴 10 m in , 期間不停的搖動(dòng), 但不要
太劇烈。
4、向管中加入等體積 500 UL的氯仿：異戊醇( 241), 12 000 rpm 4度
離心 10m i n。
5、取上清液于新離心管中并標(biāo)記, 重復(fù)步驟4。
6、取上清液于新離心管中。用等體積的 L i C l 。置于冰箱中, - 4度冷凍 15 m i n。12 000 rpm 4度離心 10 m i n。
7、棄上清液, 用 75%的乙醇清洗沉淀, 離心 5 m i n 。
做到6時(shí)，加入Licl會(huì)出現(xiàn)分層，繼續(xù)往后做，也沒(méi)有沉淀，跑膠也是空空如野。。。

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1樓 2011-09-01 11:07:51

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wanghd2826

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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自己頂一個(gè)~~

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2樓2011-09-01 11:11:25

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w2boluo

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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
西瓜(金幣+2): Good 2011-09-01 18:13:09

加LiCl以后不混勻么？？
等體積飽和氯化鋰沉淀比較常用，如果玩不轉(zhuǎn)，0.6倍異丙醇沉淀也行，但都要混勻�；径加腥庋劭梢�(jiàn)的渾濁，離心后有大塊沉淀。

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3樓2011-09-01 12:55:26

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wanghd2826

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引用回帖:

3樓: Originally posted by w2boluo at 2011-09-01 12:55:26:
加LiCl以后不混勻么？？
等體積飽和氯化鋰沉淀比較常用，如果玩不轉(zhuǎn)，0.6倍異丙醇沉淀也行，但都要混勻�；径加腥庋劭梢�(jiàn)的渾濁，離心后有大塊沉淀。

恩重新來(lái)了一下效果還不錯(cuò)，可能是氯仿：異戊醇那一步?jīng)]混勻?qū)е铝呀獠怀浞帧?

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4樓2011-09-02 15:37:13

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木蟲(chóng) (小有名氣)

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★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

LICL應(yīng)該放置至少4個(gè)小時(shí)或者過(guò)夜。

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5樓2013-12-22 00:07:54

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