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wlsky24

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[求助] 微波法提取鏈霉菌DNA

哪位有微波法提取鏈霉菌DNA的具體方法步驟哦，能否共享下，不甚感激

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【求助/交流】有沒(méi)有人做過(guò)用水煮法提取DNA的啊，望賜教已經(jīng)有21人回復(fù)

1樓 2011-09-03 13:52:23

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瓶?jī)夯?/font>

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wlsky24(金幣+2): 非常感謝，麻煩問(wèn)下有沒(méi)有什么要特別注意的事項(xiàng)？ 2011-09-04 13:07:05
wolfebst(金幣+5, MicEPI+1): 鼓勵(lì) 2011-09-04 15:52:16

1.刮取適量生長(zhǎng)良好的純化菌落于eppendorf管中，加入洗滌液lmL，振蕩混勻;
2.離心收集菌絲;
3.加入35μL裂解液，振蕩混勻，于功率為600W微波爐中處理60s;
4.加入400μL65℃預(yù)熱的抽提液，振蕩混勻;加入等體積的苯酚/氯仿抽提，離心收集上清;
5.加入異丙醇沉淀，70%乙醇洗滌，室溫干燥，加入適量TE溶解。
洗滌液:50mmol/LTris，pH8.0，25mmol/L EDAT，0.1%PVP。
裂解液:50mmol/LTris，pH8.0，25mmol/L EDAT，3%SDS，1.2%PVP。
抽提液:10mmol/LTris，pH8.0，l mmol/L EDAT，0.3mol/LNaAC，1.21%PVP。

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2樓2011-09-04 09:55:17

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試劑和離心管以及移液槍的槍頭都要滅過(guò)菌后才能使用，微波爐中加熱時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，且功率不宜過(guò)大。乙醇洗滌后要盡量將乙醇揮發(fā)干，但也不能時(shí)間放置過(guò)長(zhǎng)，不然DNA將不能溶解到TE中。抽提收集上清時(shí)要盡量不要將苯酚氯仿抽提上來(lái)，不然會(huì)影響你后續(xù)的一些試驗(yàn)的。比如說(shuō)酶切等。。。。

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3樓2011-09-04 13:37:42

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引用回帖:

3樓: Originally posted by 瓶?jī)夯?/i> at 2011-09-04 13:37:42:
試劑和離心管以及移液槍的槍頭都要滅過(guò)菌后才能使用，微波爐中加熱時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，且功率不宜過(guò)大。乙醇洗滌后要盡量將乙醇揮發(fā)干，但也不能時(shí)間放置過(guò)長(zhǎng)，不然DNA將不能溶解到TE中。抽提收集上清時(shí)要盡量不要將苯 ...

thanks.能否留個(gè)郵箱，方便請(qǐng)教？

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4樓2011-09-04 14:42:54

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5樓2011-09-04 15:07:37

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