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可愛貓新蟲 (正式寫手)
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[求助]
急求��！植物葉片中硝酸還原酶、谷酰胺合成酶、天門冬酰胺合成酶活性的測定方法
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哪位高手有植物葉片中硝酸還原酶、谷酰胺合成酶、天門冬酰胺合成酶活性的測定方法啊，尤其是天門冬酰胺合成酶活性的方法，都查不到文獻(xiàn)啊，急用�。�！ [ Last edited by 可愛貓 on 2011-9-5 at 11:09 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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缺友情(金幣+5): 挺不錯，鼓勵應(yīng)助！歡迎常來農(nóng)林版！ 2011-12-04 21:11:04
可愛貓: 回帖置頂 2011-12-15 14:12:52
可愛貓(金幣+10): 很詳細(xì)，謝謝了 2011-12-15 14:13:34
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劍葉硝酸還原酶（NR）活性的測定 采用活體法測定。 谷氨酰胺合成酶（GS）活性的測定 稱取籽粒1g于研缽中，加3ml提取緩沖液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨勻漿，轉(zhuǎn)移于離心管中，4℃下16114×g離心20min，上清液即為粗酶液。在1.6mL反應(yīng)混合液（0.1mol/L Tris-HCl緩沖液，80mol/L鹽酸羥胺，pH7.4）中，加入0.7mL粗酶液和0.7mL 40mmol/L ATP溶液，混勻，于37℃下保溫0.5h，加入顯色劑（0.2mol/L TCA，0.37mol/LFeCl3和0.6mol/L HCl混合液）1mL，搖勻并放置片刻后，于1790×g下離心10min，取上清液測定540nm處的吸光值，以加入1.6mL反應(yīng)混合液（0.1mol/L Tris-HCl緩沖液，pH7.4）為對照。 谷氨酸合成酶（GOGAT）活性的測定 參照Lin（1996）的方法，反應(yīng)混合物總體積3mL（內(nèi)含0.4mL 20mML-谷氨酰胺，0.05mL 0.1Mα-酮戊二酸，0.1mL 10mMKCl，0.2mL3mM NADH和0.5mL酶液，不足體積用25mM pH7.6 Tris-HCl緩沖液補(bǔ)足），反應(yīng)由L-谷氨酰胺啟動，340nm下測定消光值的變化。1min下降的消光值作為一個酶活性單位。 谷氨酸脫氫酶（GDH）活性的測定 參照Lin（1996）的方法。稱取鮮樣1.000g置于預(yù)先冷凍過的研缽中，加入少量石英砂和6mL提取液（10mMTris-HCl緩沖液，pH7.6，內(nèi)含1mMMgCl2，1mMEDTA和1mM的β-巰基乙醇），冰浴下研磨至勻漿，倒入離心管，4℃下15000×g離心30min，上清液即為酶液。反應(yīng)混合物中包括0.3mL0.1mMα-酮戊二酸，0.3mL1MNH4Cl，0.2mL3mMNADH和1mL酶提取液，不足體積用0.2MTris-HCl緩沖液補(bǔ)足，反應(yīng)由酶液啟動，340nm下測定消光值的變化。1min下降的消光值作為一個酶活性單位。 根據(jù)測定對象，每個方法中得樣品量可以減少。 你看看對你是否有所幫助，呵呵 |
6樓2011-12-04 16:31:59
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4樓2011-09-08 00:12:31
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5樓2011-09-09 10:44:40
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