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1樓 2011-09-14 16:12:13

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tian1203

銀蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★
dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-09-14 18:15:03
nijunjun(金幣+5): 謝謝 2011-09-14 22:51:45
nijunjun(金幣+3): 感謝您 2011-09-14 22:52:36

引用回帖:

1樓: Originally posted by nijunjun at 2011-09-14 16:12:13:
我克隆了一段啟動(dòng)子序列，然后酶切后插入PGL載體里。此載體在多克隆位點(diǎn)下游有表達(dá)熒光素酶的基因。我插入的啟動(dòng)子序列會(huì)不會(huì)影響熒光素酶基因表達(dá)發(fā)生SHIFT? 是不是在載體上表達(dá)只從ATG開(kāi)始，不管ATG前面的 ...

熒光素酶表達(dá)載體都是這樣構(gòu)建的啊，不太明白的意思？

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2樓2011-09-14 17:34:51

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天使托

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【答案】應(yīng)助回帖

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wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助！ 2011-09-15 08:37:34

只要確保啟動(dòng)子連接進(jìn)來(lái)就可以進(jìn)行下有啟動(dòng)了，就會(huì)進(jìn)行正常表達(dá)了！

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3樓2011-09-14 20:41:52

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nijunjun

禁蟲(chóng) (初入文壇)

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4樓2011-09-14 22:55:24

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wanhscn

木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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【答案】應(yīng)助回帖

nijunjun(金幣+4): 我轉(zhuǎn)染時(shí)用了一個(gè)海腎熒光素酶載體共轉(zhuǎn)染做內(nèi)對(duì)照是不是只能用WESTEWN BLOTING 檢測(cè)熒光素酶是否表達(dá)？謝謝你 2011-09-15 08:59:47

是否有陽(yáng)性對(duì)照，證明你的熒光素酶可以表達(dá)，且有活性!

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5樓2011-09-15 08:36:56

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wanhscn

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引用回帖:

5樓: Originally posted by wanhscn at 2011-09-15 08:36:56:
是否有陽(yáng)性對(duì)照，證明你的熒光素酶可以表達(dá)，且有活性!

我不做這個(gè)，不太懂，我只是感到疑問(wèn)！
你上面不是說(shuō)用螢火蟲(chóng)熒光檢測(cè)的？

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6樓2011-09-15 09:06:12

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wanhscn(金幣+2): 同意！ 2011-09-15 11:14:42

引用回帖:

4樓: Originally posted by nijunjun at 2011-09-14 22:55:24:
我構(gòu)建好載體了酶切驗(yàn)證沒(méi)問(wèn)題測(cè)序也沒(méi)問(wèn)題但是檢測(cè)螢火蟲(chóng)熒光基本沒(méi)有活性不知道是哪步出現(xiàn)問(wèn)題

可能是細(xì)胞的原因（你的啟動(dòng)子或許本身在那種細(xì)胞中表達(dá)值就不高）、也可能是轉(zhuǎn)染時(shí)質(zhì)粒的濃度沒(méi)把握好（推薦的量不一定適合你構(gòu)建的載體或者細(xì)胞）
我的轉(zhuǎn)染表達(dá)值也不高。打算找另外的2種細(xì)胞重新轉(zhuǎn)染，檢測(cè)。
你的海腎的表達(dá)值正常、還有Basic、Control的值正常嗎

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7樓2011-09-15 09:10:32

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