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xinyingsmile新蟲(chóng) (初入文壇)
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普通PCR常見(jiàn)問(wèn)題及解決對(duì)策 假陽(yáng)性 已有1人參與
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37普通PCR常見(jiàn)問(wèn)題及解決對(duì)策 假陽(yáng)性 出現(xiàn)的PCR擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致,有時(shí)其條帶更整齊,亮度更高。 2.1 引物設(shè)計(jì)不合適 選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性,因而在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí),擴(kuò)增出的PCR產(chǎn)物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。需重新設(shè)計(jì)引物。 2.2 靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染 這種污染有兩種原因:一是整個(gè)或大片段的交叉污染,導(dǎo)致假陽(yáng)性。這種假陽(yáng)性可用以下方法解決:①操作時(shí)應(yīng)小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。②除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外,所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及樣進(jìn)槍頭等均應(yīng)一次性使用。③必要時(shí),在加標(biāo)本前,反應(yīng)管和試劑用紫外線(xiàn)照射,以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性?苫ハ嗥唇,與引物互補(bǔ)后,可擴(kuò)增出PCR產(chǎn)物,而導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生,可用巢式PCR方法來(lái)減輕或消除。 上述資料來(lái)自生物114生物網(wǎng)址導(dǎo)航 (http://www.shengwu114.com/) |
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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