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fearlessman新蟲 (初入文壇)
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[交流]
懸浮細胞電容合 已有1人參與
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融合懸浮細胞的步驟與電穿孔的很類似，只是在進行高強度的電場脈沖前后，必須用低幅、高頻電場使細胞排成一條鏈。 1 用融合介質（FM）洗懸浮細胞兩次，然后懸于FM中。洗滌細胞時，在臺式離心機上1000rpm下離心3分鐘，得到細胞沉淀，棄去上清液將細胞懸于新鮮FM介質中。 2 將懸浮細胞轉移到相應的融合室內。假如要使兩種不同的細胞彼此融合，轉移前要充分混合。 3 啟動介電電泳場，其振幅通常小于200V/cm，頻率在2MHz以內，用顯微鏡檢測細胞是否排成一條鏈，調節(jié)振幅和頻率以達到最佳效果。 4 讓介電電泳場開約1分鐘后關掉，立即應用融合脈沖，其振幅數(shù)量級為1kV/cm。脈沖寬度小于1ms。在進行融合脈沖后立即再次啟動介電電泳場，常規(guī)讓其開啟約2分鐘。 5 關掉介電電泳場，讓細胞在樣品池中靜置10分鐘。 6 去掉FM，用普通培養(yǎng)基再次洗滌細胞。 7 將細胞轉移到培養(yǎng)皿，加入普通培養(yǎng)基，在培養(yǎng)箱一般條件下培養(yǎng)。 [注意事項] 1 最優(yōu)組分依使用的特定細胞種類而有明顯的變化。如果努力優(yōu)化電壓和脈沖寬度電穿孔結果仍不令人滿意，就應嘗試改變穿孔介質。 2 影響電穿孔/電融合的另一重要因素與細胞狀態(tài)有關，為達到最高效率，必須收集對數(shù)生長中期的細胞。 |
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2樓2011-09-22 08:25:38
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