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小丫的維尼熊木蟲 (小有名氣)
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[交流]
質(zhì)粒穩(wěn)定性的策略 已有1人參與
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1 質(zhì)粒的選擇：最好利用小的質(zhì)粒 2 選擇合適的插入片段或重新構(gòu)建表達載體：插入DNA片斷的大小，在質(zhì)粒分離不穩(wěn)定性中有關(guān)系；parDE基因的插入，可提高重組質(zhì)粒穩(wěn)定性。 3 選擇適當?shù)乃拗骷毎和凰拗骶陮Σ煌|(zhì)粒的穩(wěn)定性不同，而同一質(zhì)粒在不同宿主菌株中的穩(wěn)定性也有差別。 4 添加選擇壓力 在重組菌培養(yǎng)過程中通常采用增加“選擇壓力”來提高重組菌的穩(wěn)定性。 “選擇壓力”通常包括：1)在質(zhì)粒構(gòu)建時，加入抗生素抗性基因，在生物反應(yīng)器的培養(yǎng)基中加入抗 生素；2)利用營養(yǎng)缺陷型細胞作為宿主細胞，構(gòu)建營養(yǎng)缺陷型互補質(zhì)粒，設(shè)計營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基；3)噬菌體抑制及轉(zhuǎn)化子中自殺蛋白的表達。這種方法對于質(zhì)�；蛩拗骷毎旧戆l(fā)生了突變，雖保留了選擇性標記、但不能表達目的產(chǎn)物的細胞無效。 5 控制培養(yǎng)條件 5.1 培養(yǎng)基組成：葡萄糖、磷酸鹽和無機鹽是限制性基質(zhì)(pBR325例外)； 5.2 氧傳遞和攪拌：溫和的攪拌速率 5.3 溫度和pH 溫度敏感型質(zhì)粒，常采用二階段溫度培養(yǎng)系統(tǒng)。重組工程菌的生長和產(chǎn)物合成時的pH值常不同。 5.4 選擇合適的培養(yǎng)操作方式 1)適當采用周期性分批流加操作方式。另外，選擇合適的流加方式可提高質(zhì)粒在非選擇性培養(yǎng)基中的穩(wěn)定性和工程菌的產(chǎn)量。 2)連續(xù)培養(yǎng)的稀釋速率周期變化時，周期的振幅和頻率是質(zhì)粒穩(wěn)定性的重要參數(shù)。 3)固定化培養(yǎng) 生物一一四，生物導(dǎo)航之家。 |
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