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求助-TGGE和DGGE的電泳圖譜
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TGGE和DGGE的電泳圖譜，最好有詳細(xì)解釋，舉例圖就可以，最后是混合菌跑出來的電泳圖，本人不是學(xué)分子生物的，不太懂，看了半天了都不懂，急用呀，謝謝親愛的蟲蟲們了。 [ Last edited by 1949stone on 2011-10-9 at 10:02 ] |
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 【分子生物】EPI帖 |
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紅多多
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【答案】應(yīng)助回帖
1949stone(MolEPI+1): 很好 很活躍啊 2011-10-09 10:03:13
weiranran(金幣+10): 滿意，謝謝，呵呵。。。 2011-10-09 21:10:35
weiranran(金幣+10): 滿意，謝謝，呵呵。。。 2011-10-09 21:10:35
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TGGE和DGGE都是能區(qū)分分子大小相同，但是堿基序列不同的實(shí)驗手段。其原理就是能使雙鏈DNA在電泳的過程中局部變性，由于各種DNA序列不一致，在同一溫度解鏈程度是不一樣的這樣的。由于解鏈情況不一樣，在聚丙烯酰胺膠里面的泳動速度也不一樣，從而可以區(qū)分開堿基對數(shù)相同但是序列不同的DNA，當(dāng)然這個也可以做RNA，就是對膠和溫度梯度的要求要稍微高點(diǎn)。 tgge是指溫度梯度電泳。就是說你電泳過程中膠板各個區(qū)域溫度是不一樣的，這種電泳分為水平和垂直電泳兩種，水平的指電泳方向和溫度梯度方向一致的，垂直的就是兩者方向是垂直的。 先說說水平的，由于方向是一致的電泳出來的圖形就是這中情況（圖一）原因就是在電泳初期，由于DNA雙鏈分子核苷酸數(shù)量是一樣的，開始只有一條帶（當(dāng)然這個時候你看不到，因為沒有染色）然后在經(jīng)過不同溫度梯度的時候DNA發(fā)生溫度導(dǎo)致的局部解鏈，形態(tài)發(fā)生變化，從而改變泳動速度，不同的DNA分子由于核苷酸組成和分布不一樣，其解鏈程度不同，從而得出圖一這種結(jié)果。 垂直電泳，電泳初期，點(diǎn)樣孔跨越各個溫度梯度，所以一開始每個種DNA分子都處于不同的溫度區(qū)間，如果溫度從左到右增加，那么圖片中最左邊的條帶就是略有變性，然后中間有一個上升狀的就是DNA解鏈從初級到完全解鏈的溫度區(qū)間，最右邊條帶就是完全解鏈后條帶電泳出來的結(jié)果。 一般做一組TGGE是先用垂直電泳摸清楚變性區(qū)間的大致情況，然后用水平電泳來做出最終結(jié)果圖。 DGGE和TGGE原理大致相同，只不在膠板中不是溫度使DNA變性而是加入不同濃度的變性計使DNA變性，原理都是一樣的。 希望這對你有幫助 圖一 圖二 |
2樓2011-10-09 09:52:15
紅多多
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西瓜(金幣+2): 熱心！最近很給力！ 2011-10-10 17:13:45
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http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=3670729&pid=2297628&page=2#pid2297628 我在上面?zhèn)髁藗�實(shí)驗手冊 你也可以看看 嘿嘿 |
3樓2011-10-09 10:23:45
4樓2011-10-09 21:13:26
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