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HarveyWang捐助貴賓 (知名作家)
海外行者
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[交流]
微生物學到這個份上，讓我無言~~~ 已有29人參與
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【你好！想向你請教一個問題，可否？】 -----------Go on, Pleas. 【你好，這是我發(fā)的一個求助帖，至今沒有回復啊！真不好意思，沒養(yǎng)成登陸小木蟲的習慣，能否麻煩看一下我的問題是怎么一回[求助]金黃色葡萄球菌退化原因？？ 各位蟲友好，請大家?guī)兔Ψ治鲆幌挛椰F(xiàn)在遇到的問題，著急啊，研三了影響實驗進度��！實驗為抗菌活性的檢測，檢測樣品是否抑制金黃色葡萄球菌,簡稱SA，菌株SA出現(xiàn)問題也不是第一次了，菌株是從學院的微生物實驗室轉(zhuǎn)接了兩支斜面過來，起先活性還不錯，（自己認為的）牛肉膏蛋白胨1天半可以長滿平板的，但后來不知道什么原因，菌株不僅在平板上長得慢，而且密度也不如從前，最后 直接就不長了。自己分析原因，菌株退化，培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件，覺得很有可能是菌株退化，又從那個實驗室轉(zhuǎn)接過來兩支斜面，經(jīng)過傳代3次活化后，我就將SA配制成一定濃度的菌懸液，裝于15%的甘油保存管中，保存于4攝氏度下。起先SA活性挺好的，1天就可以長滿平板，持續(xù)了1個半月，但好景不長菌株又不行了，連續(xù)做了三次，三批平板的SA都不長,根本出不來檢測結(jié)果，這次已經(jīng)培養(yǎng)了40個h，只看見平板上零星長出來幾個單菌落，指示菌問題不解決，實驗就沒法進行啊! 請各位幫忙分析一下原因吧，如果是菌株退化，也就2個月時間，怎么這么容易退化呢？以前是直接斜面保存，后來通過跟其他實驗室交流，改用了甘油低溫保存方法�！� ----------------是你的菌株保存方法出了問題�。�！ 用20-25%的甘油保存新鮮的細菌培養(yǎng)液，是在零下20至 一80℃，一年根本不會出問題。 誰告訴你在4℃保存的？�。�！ 你學微生物的，怎么這么基本的知識都不了解？ ----------------配制500g/L的甘油母液，121攝氏度滅菌20-30min。 取OD 1-5 的細菌新鮮培養(yǎng)液 100 uL加入到 含有100 uL的 500g/L的甘油母液中。 用滅菌的1.5mL的EP管保存。 一次保存10-20管，每次拿出一支來涂平板培養(yǎng)新鮮的菌落。零下20度，最好零下80度保存。 兩年基本沒問題。 你。。。你。。。。讓我說你什么呢？你都研三了，這樣的事情還搞不定？！ 【500g/L的甘油母液，甘油不是液體的嗎？什么叫母液呢，請問可否告知你這個方法的參考來源呢？ 恕我還想向你請教，真的想學習，OD值和細菌數(shù)目如何建立關(guān)系呢？如果OD值為1，那么細菌的數(shù)目為多少呢？因為看了文獻的描述是細菌數(shù)目為多少cfu/mL。 我們實驗室就是這樣做的，并沒有太在意溫度是4攝氏度會有如此大的影響，我知道低溫是保存菌種的一個因素，但為什么要這么低的溫度呢，4攝氏度為何就會不行呢，至少可以保證幾個月吧？】 -----------我所說的是一個微生物實驗室 最基本的知識。 一開始你這樣問，我還以為你是誠心氣我的。 所以我還懷疑你根本不是微生物專業(yè)的。 甘油母液即 Glycerol stock solution. Glycerol stock solution (500g/L)： 40 ml 甘油用雙蒸水定容成100 mL（也即40% v/v甘油溶液）。專門用來儲存細菌或霉菌孢子的。。。因為屆時按1:1體積加入，就成了最終甘油20%的含量。這個濃度可以使細菌在低溫下儲存很久而不會死掉。 OD和CFU/mL需要你用自己的細菌做稀釋平板，計算得出。 我告訴你的數(shù)值不適合你的細菌。 用甘油保存菌株，什么溫度最好，這是微生物專業(yè)的研一學生就應(yīng)該了解的知識。 你再不懂，也應(yīng)該知道有數(shù)據(jù)庫或google可以查。 |
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9樓2011-10-13 22:50:12
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