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@@xiaowu@@銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
有誰做過amoA引物 硝化細(xì)菌 pcr
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有誰做過amoA引物 硝化細(xì)菌 pcr 我做了很長(zhǎng)時(shí)間 都沒有做出來 降落 巢式 梯度pcr都試了 請(qǐng)大俠幫一下 |
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bear0329
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3樓2011-10-13 11:38:49
老夏853
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
rainwander(金幣+3, MicEPI+1): 鼓勵(lì)交流 2011-10-13 10:54:39
@@xiaowu@@(金幣+5): 謝謝 2011-10-18 13:24:54
rainwander(金幣+3, MicEPI+1): 鼓勵(lì)交流 2011-10-13 10:54:39
@@xiaowu@@(金幣+5): 謝謝 2011-10-18 13:24:54
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我有做過~~ 這個(gè) 你可以從一下幾點(diǎn)考慮： 1 模板質(zhì)量問題： 如果是土壤或者淤泥之類的 模板雜質(zhì)過多 會(huì)影響pcr 2 模板中究竟有沒有aob 的存在，最好能用其他方法驗(yàn)證一下，比如富集培養(yǎng)后顯色反應(yīng) 3 如果存在，用巣式的 應(yīng)該會(huì)做出來效果很好，不過需要注意，第一次pcr產(chǎn)物需要稀釋50到100倍 |
2樓2011-10-13 10:33:27
lzhhok
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
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5樓2011-10-17 13:19:05
★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857(金幣+5): 鼓勵(lì)新蟲 2011-10-24 10:22:24
zhang8826857(金幣+5): 鼓勵(lì)新蟲 2011-10-24 10:22:24
| 建議先純化好DNA，可以采用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化或?qū)I(yè)的土壤DNA提取試劑盒純化；其次改變PCR條件，我以前的做法是降低退火溫度至49度，增加Taq酶用量至25U/50ul，增加循環(huán)數(shù)至35個(gè)。如果還是擴(kuò)不出來建議重新提DNA，純化，擴(kuò)增。同時(shí)強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)，環(huán)境樣品DNA一定要分裝保存在-80度冰箱，防止其降解。 |
6樓2011-10-24 10:01:23
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