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hrjxx新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
TCA/丙酮沉淀，蛋白為什么不溶呢？？
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| 大家好，我用0.2%DTT,10%TCA的丙酮溶液沉淀蛋白后，為什么蛋白就是不溶呢？？一直是離心后的那種塊狀，不能被溶解開(kāi)啊，大家知道是什么原因嗎？？我的裂解液成分是：9M尿素，1%DTT,4%CHAPS,0.2%CA,沉淀后干燥12分鐘，室溫溶解了6個(gè)小時(shí)候，還是塊狀，大家指教下啊! |
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2樓2011-10-16 07:29:43
蕾雷
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3樓2011-10-16 09:06:24
hrjxx
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4樓2011-10-16 20:00:19
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5樓2011-10-16 21:46:09
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6樓2011-10-17 02:02:48
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wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-10-17 18:47:59
wanhscn(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-10-17 18:47:59
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我覺(jué)得不要用TCA法，我現(xiàn)在直接用7M尿素，2M硫尿的方法，離心35000g（我們實(shí)驗(yàn)室達(dá)不到40000g或者100000g）4度離心60min，聚焦電壓也可以達(dá)到7000v，我覺(jué)得應(yīng)該沒(méi)什么很大問(wèn)題。 我現(xiàn)在也在做預(yù)實(shí)驗(yàn)，我的聚焦沒(méi)什么問(wèn)題了，但是第二向效果不佳，要么有橫紋，要么點(diǎn)有拖尾，很苦惱呢。 ps：我提的動(dòng)物肝臟蛋白，多多交流。 |
7樓2011-10-17 18:44:55
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8樓2011-10-17 20:10:25
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9樓2011-10-20 21:44:33
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10樓2011-10-23 22:47:02
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