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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 細菌的培養(yǎng)
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小丫的維尼熊木蟲 (小有名氣)
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[交流]
細菌的培養(yǎng) 已有9人參與
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一般的細菌都可以用人工的方法進行培養(yǎng)，以研究它們的各種生物學特征或制備菌苗。培養(yǎng)細菌時，除采用合適的培養(yǎng)基外，還要供給一些必要的培養(yǎng)條件，如溫度、氣體等。 1. 進行活化的話是用斜面好還是放液體培養(yǎng)基搖瓶好呢？保藏的話用多少濃度的甘油？ 1.1 斜面和平板活化與液體活化都可以，斜面較好，但液體活化如果時間控制得好，不會造成傳代多的現(xiàn)象。 1.2 基因工程酵母的保存方法：與野生菌一樣，要用甘油保藏的話，最好是在對數(shù)期，一般搖床培養(yǎng)20小時左右，過夜培養(yǎng)后保藏就可以。可將酵母菌在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)3~5天，然后與100%甘油1：1混合凍存即可.即甘油濃度50%。 2. 菌體不生長 2.1 先查培養(yǎng)條件。溫度很關鍵， 校正一下溫度計是否正常指示；還要其他條件（濕度，搖床轉速等）。 2.2 查原材料。尤其是原材料的保存問題，最好在4度冷藏。 2.3 查菌種 2.4 如果長得慢，加大接種量看一下。 2.5 消毒有沒有問題 3.為什么會發(fā)生菌體自溶？發(fā)生菌體自溶會讓發(fā)酵參數(shù)發(fā)生什么變化 自溶和培養(yǎng)條件有關系，比如PH突然變化會引起菌體滲透壓的變化導致自溶，還有溫度的影響等；一般來說菌體也有自己的生存時限（依培養(yǎng)物變化而變化），也會產生自溶。 3.1 控制條件不好，PH和溫度不適合溶氧太低使菌體生長異常，產生溶菌酶自溶； 3.2 營養(yǎng)條件不好，營養(yǎng)跟不上，碳源不足自溶； 3.3 菌體衰老自溶，菌種培養(yǎng)時間過長，造成老化。改換酵母粉，增加一些生物素及微量元素可以消除自溶的問題； 3.4 過早的表達產物往往會對細胞產生毒害作用，使宿主菌的比生長速率下降甚至使細胞死亡、自溶； 3.5 感染噬菌體 發(fā)生菌體自溶現(xiàn)象：pH升高，溶氧升高，氨氮回升，鏡檢時菌體空、碎 4. 培養(yǎng)基組分對芽孢桿菌產生芽孢的影響 一般加入Mn離子有助芽孢形成，另外培養(yǎng)基中注意磷酸鹽含量不要太高了，高了不利于形成芽孢的。Mn的濃度大概在5-50ppm之間。 5. 質粒小量提取之細菌的培養(yǎng)及收集 將含有質粒菌種接種在LB固體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培養(yǎng)12-24h。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養(yǎng)基(含50μg/ml Amp)中,37℃振蕩培養(yǎng)約12小時至對數(shù)生長后期。 |
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