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xufeifei724銅蟲 (小有名氣)
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| 請教：煙草中相關(guān)基因RNAi載體的構(gòu)建以及煙草的遺傳轉(zhuǎn)化。 |
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mit95
金蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
xufeifei724(金幣+20, 博學(xué)EPI+1): 謝謝！ 2011-10-17 16:27:57
| 一個RNAi單元是在相向的CaMV35S啟動子之間插入gus基因片段，該片段兩端帶有SapI的酶切位點(diǎn)，基因組DNA在用Sau3AI酶切后，在粘性末端補(bǔ)加一個T就可以和SapI的粘性末端互補(bǔ)，從而把基因組DNA片段克隆到雙向啟動子之間，轉(zhuǎn)入植物表達(dá)得到相應(yīng)的dsRNA，實(shí)現(xiàn)RNA干擾作用；另一套的RNAi單元在是相向的CaMV35S啟動子之間插入gfp基因片段，該片段兩端帶有Bsu36I的酶切位點(diǎn)，可將經(jīng)RT-PCR得到的cDNA在dTTP的保護(hù)下，用T4DNApolymerase處理后通過Bsu36I克隆到相向啟動子之間，轉(zhuǎn)入植物表達(dá)得到相應(yīng)的dsRNA；需要通過農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)的感染將gus基因和gfP基因轉(zhuǎn)入煙草，經(jīng)過潮霉素抗性篩選，得到能表達(dá)gu。 |
2樓2011-10-17 15:16:33
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