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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 專業(yè)學科區(qū) » 農(nóng)林 » 植保 » 求助，銀染法背景色嚴重
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[求助]
求助，銀染法背景色嚴重
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采用聚丙烯酰胺凝膠電泳跑的蛋白，之后采用銀染法進行染色，染色效果重復性很差，偶爾條帶清晰，大多數(shù)時候整個膠都變褐色了，分不清條帶，不知道到底是什么原因，希望有做銀染法經(jīng)驗的同學傳授一下~~謝謝~~ 這是我做的銀染法： 1.水洗3次，5min/次 2.固定：固定液（25ml乙酸，100ml乙醇，加水至250ml）搖浸2h 3.敏華：敏化液（0.5g硫代硫酸鈉，17g乙酸鈉，75ml乙醇，加水至250ml ）搖浸30min 4.漂洗：250ml雙蒸水洗3次，5min/次 5.銀染：AgNO3溶液（1.25g/500ml水）中搖浸20min（報紙避光） 6.漂洗：250ml雙蒸水洗2次，1min/次 7.顯色：顯色液（12.5g碳酸鈉，200微升甲醛，加水至500ml）顯色約2-5min，2次 8.終止：終止液（3.65gEDTA溶于250ml水）搖浸10min 9.漂洗：500ml雙蒸水洗2次，10min/次 在這先謝謝大家了~~~做過好多次銀染都不算成功，很多時候背景和條帶同時變成褐色，希望能找到原因~~~呵呵 |
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