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常用細胞株資料
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1、CHO-K1細胞是實驗中非常常用的一個細胞株，在生物制藥中使用也非常廣泛。該細胞株培養(yǎng)條件簡單，貼壁強度適中，比較容易轉(zhuǎn)染，很適合用它來研究一般哺乳動物基因的功能。 來源：Cricetulus griseus (中國倉鼠) 卵巢 形態(tài)：表皮細胞 生長特性：貼壁 注釋：CHO-K1由CHO衍生而來，CHO是T. T. Puck 在1957年從一只成年中國倉鼠卵巢獲得的（1）。 培養(yǎng)液：Ham's F12K （含2 mM L-谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）， 10% 胎牛血清。 傳代：吸去培養(yǎng)液。 用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：4到1：8為宜，傳代期間培養(yǎng)液更換1-2次） 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 2、293細胞比較容易轉(zhuǎn)染，是一個很常用的表達研究外源基因的細胞株。293細胞的一個衍生株：293T/17的轉(zhuǎn)染效率更高，成為廣大研究者研究基因功能的一個強大工具。 293細胞的缺陷是生長過程中貼壁強度比較小。所以在實驗過程中容易流失，從而影響實驗結(jié)果。如果一個實驗室新得到的293細胞是郵寄得到的并且細胞在培養(yǎng)瓶中，就需要讓細胞沉降幾天時間，因為大量細胞會漂浮在培養(yǎng)液里。 來源：人體腎臟 形態(tài)：上皮細胞 生長特性：貼壁 注釋：該細胞含腺病毒5 DNA 。 培養(yǎng)液： MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）， 10% 馬血清（熱滅活）。 傳代： 吸去培養(yǎng)液。 用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：2到1：4為宜，傳代期間培養(yǎng)液2-3天更換1次） 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 3、Vero細胞被成功的用來培養(yǎng)狂犬病疫苗、乙腦疫苗等多種疫苗，在非典期間又為研究冠狀病毒做出貢獻，在醫(yī)藥研究種廣泛應用。 來源： 非洲綠猴腎細胞 形態(tài)：上皮細胞 生長特性：貼壁 注釋：該細胞是日本千葉大學的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日從一只正常的成年非洲綠猴腎組織培養(yǎng)出來的。 培養(yǎng)液：MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）， 10%胎牛血清 傳代：吸去培養(yǎng)液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1:3至1:6為宜，傳代期間培養(yǎng)液每周更換2-3次） 凍存： 95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 4、NIH-3T3細胞在實驗室常用來做轉(zhuǎn)染及基因表達的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。 來源： Mus musculus（小家鼠）胚胎 形態(tài)：成纖維細胞樣 生長特性：貼壁 注釋：為得到適合轉(zhuǎn)染得細胞株，NIH-3T3細胞至少連續(xù)克隆過5次。NIH-3T3細胞容易轉(zhuǎn)染DNA，鼠痘病毒陰性。 培養(yǎng)液：DMEM（含4mM L-谷氨酰胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氫鈉），10%小牛血清 傳代：吸去培養(yǎng)液。（不要讓細胞長滿培養(yǎng)器皿，長滿80%為宜） 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以3-5x103/cm2為宜，傳代期間培養(yǎng)液每周更換2次） 凍存： 95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 5、PC-12細胞是一個常用的神經(jīng)細胞株。 來源： Rattus norvegicus (褐家鼠) 腎上腺嗜鉻細胞瘤（一種交感神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤） 形態(tài)：多角型細胞 生長特性：貼壁較松，容易成團 注釋：PC-12細胞株來源于一種可移植的鼠嗜鉻細胞瘤，該細胞對神經(jīng)生長因子（NGF）有可逆的神經(jīng)元顯形反應，該細胞不合成腎上腺素。 培養(yǎng)液：Ham's F12K （含2 mM L-谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）+15%馬血清+2.5% 胎牛血清。 傳代：吸去培養(yǎng)液。 加入新的培養(yǎng)液，用吸管吹下細胞或用手拍打培養(yǎng)瓶或刮下細胞到培養(yǎng)液中，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：4為宜，傳代期間2-3天更換培養(yǎng)液） 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 6、Hela細胞是在所有細胞株中最著名的。它來源于美國的Helen Lane，她1951年死于子宮頸癌。但源自她的腫瘤的細胞卻在世界各地的實驗室中得到廣泛的使用。 來源：人宮頸癌 形態(tài)：上皮細胞 生長特性：貼壁 注釋：Hela細胞顯角蛋白免疫沉淀染色陽性，包含HPV-18序列，有正常水平的pRB和p53的低水平表達。 培養(yǎng)液：MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）， 10%胎牛血清 傳代：吸去培養(yǎng)液。 用0.25%（w/v）Trypsin-0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶活性）。 加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：2到1：6為宜，每周傳代2-3次） 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 7、Sf9細胞常在Baculovirus（桿狀病毒）表達系統(tǒng)中用作宿主細胞，來表達外源蛋白。 來源： Spodoptera frugiperda （草地夜蛾）卵巢細胞 形態(tài)：上皮細胞 生長特性：貼壁 注釋：Sf-9細胞是由G.E. Smith 和 C.L. Cherry 在1983年從細胞株IPLB-SF 21 AE得來的一個克隆。IPLB-SF 21 AE是1977年由Vaughn等從草地夜蛾蛹的卵巢組織得到的。 培養(yǎng)液：TNM-FH培養(yǎng)液：照廠家的說明配好Grace's Antheraea 培養(yǎng)液，每升培養(yǎng)液加3.3g酵母粉和3.3g乳白蛋白水解物，用1M KOH調(diào)pH到6.2-6.4過濾除菌，4℃保存。完整培養(yǎng)液在使用前加入10%熱滅活的胎牛血清。 傳代：用吸液管吹洗細胞使其懸浮，或用手從側(cè)面拍打細胞培養(yǎng)瓶(當用大細胞培養(yǎng)瓶時)重懸細胞。（當用來接種的細胞重懸前就有很多細胞漂浮，要吸掉漂浮細胞及舊培養(yǎng)液，加入新培養(yǎng)液重懸細胞。 按合適比例傳代細胞到新培養(yǎng)器皿中。 （以1：5或更多為宜，每2-3天傳代一次） 28℃培養(yǎng)（不用CO2培養(yǎng)箱）。 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 8、BHK21細胞 來源：敘利亞倉鼠腎細胞 形態(tài)：纖維原細胞 生長特性：貼壁 注釋：這個細胞來自于一只出生一天的新生倉鼠，隨后被改造成一個易于作表達的宿主細胞株。 培養(yǎng)液：MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）+ 10%胎牛血清 傳代：吸去培養(yǎng)液。 用0.25%（w/v）Trypsin-0.03 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶活性）。 加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1：2到1：10為宜，每周傳代1-2次） 凍存：95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 9、Hep G2細胞來源于一個15歲白人的肝癌組織。該細胞分泌多種血漿蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、鐵傳遞蛋白等。該細胞能大容量培養(yǎng)，乙肝表面抗原陰性，對G418有抗性，對人生長激素有刺激反應。 來源： 人肝癌細胞 形態(tài)：上皮細胞 生長特性：貼壁 注釋：該細胞表達3-羥基-3-甲基戊二酸輔酶A還原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。該細胞在有百草枯(英文名：gramoxone)的環(huán)境下過氧化氫酶mRNA表達增加，ApoA-I mRNA 表達減少。 培養(yǎng)液：MEM（ 含 2 mM L-谷氨酰胺 和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸鈉）+ 10%胎牛血清。 傳代：吸去培養(yǎng)液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清會抑制胰酶的活性）。 加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)約5分鐘，直到細胞全部脫落。 加6-8毫升培養(yǎng)液，用移液器把細胞吹散。 加適量的細胞到新的培養(yǎng)器皿中。（以1:4至1:6為宜，傳代期間培養(yǎng)液每周更換2次） 凍存： 95%培養(yǎng)液+5%DMSO凍存于液氮。 |
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