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todouhy銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
PCR擴(kuò)增去除終止密碼子
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| 最近要構(gòu)建一個(gè)重組質(zhì)粒，在原有的重組質(zhì)粒目的基因的C末端上面加上一段基因，所以首先要去除原來(lái)目的基因的終止子TAG，設(shè)計(jì)引物后直接拿重組質(zhì)粒作為模板，擴(kuò)增去除終止子的目的基因，但是怎么也擴(kuò)增不到我的目的條帶1.7kb，我的重組質(zhì)粒有5.9kb左右，載體是pse380，非特異性條帶為1.5kb以及2.7kb左右，后來(lái)酶切重組質(zhì)粒，膠回收1.7kb得到目的基因，用這個(gè)作為模板來(lái)擴(kuò)增，跑膠還是沒(méi)有，在1.0kb左右很亮的條帶，用的是50-60的溫度梯度，大家?guī)蛶兔Γx謝啊，如果還有疑問(wèn)，我在寫清楚點(diǎn)！ |
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2樓2011-10-30 20:53:20
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3樓2011-10-31 00:05:04
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5樓2011-10-31 11:13:28
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