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sunxuyan0608鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)教一個(gè)關(guān)于BHK-21細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的問(wèn)題
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各位大俠，我最近在做瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。用的是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法，載體是pcDNA3.1，插入了一個(gè)干擾素的基因，用堿裂解法大量提取的質(zhì)粒，OD260nm/280nm為1.9，應(yīng)該很純了。我轉(zhuǎn)染了陽(yáng)性質(zhì)粒，同時(shí)轉(zhuǎn)染了空載體做陰性對(duì)照，還有空細(xì)胞做陰性對(duì)照。 轉(zhuǎn)染兩天后做間接免疫熒光，一抗為我自己做的多抗血清（陽(yáng)性血清和陰性血清），二抗為商業(yè)化的熒光二抗，結(jié)果奇怪的是雖然我的陽(yáng)性質(zhì)粒出現(xiàn)了熒光，但是我的陰性血清對(duì)照，空載體陰性對(duì)照和空細(xì)胞陰性對(duì)照也都出現(xiàn)了熒光，而且熒光和陽(yáng)性質(zhì)粒一樣明顯。 已經(jīng)重復(fù)做了三次試驗(yàn)，結(jié)果都是這樣的，而且更換過(guò)一抗和空載體，真的是找不出原因了。  懇請(qǐng)大家?guī)兔Γ∪f(wàn)分感謝！ |
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