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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 化學化工區(qū) » 分析 » 求操作常識
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[求助]
求操作常識
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求做HPLC，LC-MS的常識性資料，細節(jié)性的東西，比如說流動相的瓶子要放在固定的位置這方面的，我經(jīng)常犯錯誤，現(xiàn)在做起實驗來心驚膽戰(zhàn)的，因為以前沒有做過HPLC，所以繼續(xù)這些資料，求各位大哥大姐能夠幫幫我，真的很謝謝��！謝謝！ [ 來自科研家族 藥物制劑 ] |
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 色譜分析 常用知識 |
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2樓2011-11-07 00:08:13
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3樓2011-11-07 11:26:09
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【答案】應(yīng)助回帖
TLC菜鳥(金幣+10): 謝謝！這個肯定是你的經(jīng)驗，非常謝謝你的教導。 2011-11-07 23:08:26
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給你講講一點吧： 流動相： 流動相一定要過濾干凈，最好用色譜純；確認你的柱子能夠使用該流動相；比例要準確，這個是重復(fù)性好的重要一點；擺放位置不要在陽光和溫度高的地方，最好屋子有恒溫恒濕。 色譜柱： 色譜柱的知識要知道，哪些流動相、多少酸堿性、多少極性可以進入；換柱子的時候不要裝反了；做實驗的時候記得開恒溫系統(tǒng)；不用的柱子一定要用流動相注滿封口保存，不能干放。 檢測器： 你的機器有什么檢測器，檢測原理是什么，你的東西能不能用這個檢測器檢測？檢測器的設(shè)定條件，比如你是紫外可見，那波長應(yīng)是多少？ 一般操作： 進樣方式要正確，注意先后順序；一定要等基線平穩(wěn)后才能進樣；時刻關(guān)注管路是否有氣泡存在；時刻關(guān)注壓力是否在合理數(shù)值，太高太低都有問題的；注意清潔衛(wèi)生，用完就打掃桌面，擦灰塵。 分析方法： 最好有可靠文獻支持，不要亂用。經(jīng)驗多了就可以自己摸索方法了。 純手打，非復(fù)制粘貼！ |
4樓2011-11-07 16:52:25
5樓2011-11-08 11:46:58
zn19831231
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6樓2012-01-05 13:49:11
zhrmghgmn
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西湖醉魚(金幣+5): 感謝你提供的資料，歡迎常來 2012-01-05 18:56:48
TLC菜鳥(金幣+3): 2012-03-13 23:00:52
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西湖醉魚(金幣+5): 感謝你提供的資料，歡迎常來 2012-01-05 18:56:48
TLC菜鳥(金幣+3): 2012-03-13 23:00:52
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轉(zhuǎn)載一些，希望對你有用： 色譜柱的使用和維護注意事項 色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。 ① 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。 ② 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬�，反之亦然�?br /> ③ 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。 ④ 選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。 ⑤ 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。 ⑥ 經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。 下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì)，已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那么可以省略最后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì)，在甲醇（乙腈）沖洗時重復(fù)注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質(zhì)。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次。此外，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染。 陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）、甲醇、水依次沖洗。 ⑦ 保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。 ⑧ 色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗；另一種可能是大分子進入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。 在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復(fù)到新柱的水平。 柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm），可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。 通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀Ｐ碌纳V柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。 每次工作完后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。 |
7樓2012-01-05 18:43:19
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