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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于單克隆和單基因型
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關于單克隆和單基因型
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各位好，有個問題困擾我好久了，最近構建了一個工程菌，是將野生型菌株的一個啟動子片段，連入T載體，再用同源重組的方法整合進野生型菌株基因組上的另一個位置，然后挑選陽性克隆測序驗證。 但是糾結的是我對陽性克隆的插入片段進行PCR測序后，發(fā)現(xiàn)有套峰，于是T-A克隆后再測序，發(fā)現(xiàn)10個克隆子中多數(shù)有3個位點突變，與克隆前測序套峰的位置一致（見圖片中紅色框標注），少數(shù)沒有突變。因此認為是菌不純，沒跳到單克隆，然后將菌株稀釋劃線，又挑了很多單克隆測序，均發(fā)現(xiàn)有套峰，也就是一直沒有得到基因型單一（或者都突變，或者都不突變）的菌株，這是為什么呢？ 難道單克隆菌落在復制時不同細胞之間的基因組拷貝間也會有堿基差異嗎？單克隆就一定是單基因型嗎？ 望有經(jīng)驗的大俠能多多指點~~~不勝感激~~~已經(jīng)做了2個多月了，再沒結果實在沒法交代了  注：我用的是不動桿菌菌株。 測序峰圖 |
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