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wangdejuan銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
等度洗脫7分左右出的峰不好，梯度洗脫7分的鋒出在坡上啊怎么辦？
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| Caco-2實驗得到的樣品分析流動相：甲醇：磷酸緩沖鹽為25:75，等度洗脫時6分左右出現(xiàn)的鋒不好，梯度洗脫：初始比例洗脫至5分時換成35:65,出峰時間在7分左右，但出在山坡上，怎么辦？ |
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2樓2011-11-17 17:08:45
wangdejuan
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3樓2011-11-18 09:35:34
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【答案】應助回帖
wangdejuan(金幣+3): 那7分的鋒就不是等度時6分多那個峰了對嗎？因為樣品是細胞代謝過的，不清楚會出幾個峰，應該在那個時間出峰，有什么好方法嗎？ 2011-11-18 14:00:43
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1.懷疑你的梯度基本沒有生效，等度時25%甲醇6分多出峰，梯度7分出峰，基本沒有太大改變。因為35%的梯度比例從泵頭到流出色譜柱需要有一小段時間（死時間t0）。你在0-5分鐘走25%甲醇，化合物已經(jīng)在色譜柱中沖洗了一段時間了，等你在5分鐘改變梯度時，化合物差不多都被洗脫出來了。 2.你在5分鐘的時刻把甲醇從25%立即過渡到35%，這樣也是會出臺階的。(因為甲醇雖然吸收很小，但也是有吸收的，尤其是在低波長)。而你的化合物差不多就是在這段時間出峰，當然會出在臺階上了。 |
4樓2011-11-18 12:31:23
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5樓2011-11-18 12:33:37
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7樓2011-11-18 15:40:29
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karl2100(金幣+1): 謝謝回帖！ 2011-11-19 00:31:52
karl2100(金幣+1): 謝謝回帖！ 2011-11-19 00:31:52
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不知道樓主的6分多，7分鐘的峰是不是一個物質(zhì)，因為條件變化了。 既然化合物被細胞代謝過了，代謝物肯定極性增加，出峰比原形化合物快的。 我覺得樓主可以把初始梯度比例調(diào)整的小一些，比如以10%甲醇或15%甲醇開始梯度。再者，走梯度是要不斷變化流動相組成的，樓主在0-5分鐘的流動相組成沒有變化，在5分鐘的時刻突然將組成變化為35%甲醇，這肯定會再圖譜中顯示出臺階的，好像很少遇到這種突然變化的梯度，HPLC的話，1分鐘增加5%的有機相組成都已經(jīng)比較快了，何況瞬時將比例增加10%呢？ |
8樓2011-11-18 17:01:52
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