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[求助]
蛋白純化鎳柱、分子篩
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用tris-hcl ph8的緩沖液破菌、溶解蛋白 上鎳柱時用tris-hcl ph8，200mM咪唑洗脫蛋白下來 問題：上分子篩的平衡緩沖液和洗脫緩沖液用什么？加不加咪唑呢？ |
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sspxiaoji
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【答案】應助回帖
★ ★ ★
256k(金幣+3): 過鎳柱用500mM咪唑洗脫凍于-30度，今天拿出蛋白冰上凍融后發(fā)現(xiàn)沉淀不少，如何避免沉淀有沒有好的建議？ 2011-11-22 10:50:28
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 2011-11-22 12:42:00
256k(金幣+3): 過鎳柱用500mM咪唑洗脫凍于-30度，今天拿出蛋白冰上凍融后發(fā)現(xiàn)沉淀不少，如何避免沉淀有沒有好的建議？ 2011-11-22 10:50:28
silicare(金幣+3, BioEPI+1): 2011-11-22 12:42:00
| 就單純分子篩的話，對緩沖液要求不高，大部分緩沖液都可以。但是分子篩經(jīng)常用來對樣品脫鹽或替換緩沖液，然后進行后續(xù)處理，如酶切，進一步純化等。也就是說你過了鎳柱后，要把樣品里的咪唑或TRIS替換成其他的緩沖液，直接用你所需要的緩沖液平衡柱子，然后上樣。分子篩一般沒有洗脫這個概念，就用一個緩沖液走就可以了。建議可以看看分子篩的原理，很容易理解的。 |
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256k5樓2011-11-21 12:01:18
doublehelix
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2樓2011-11-20 11:31:33
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3樓2011-11-20 20:34:12
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4樓2011-11-21 00:04:37
haoziying
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6樓2011-11-21 22:34:58
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9樓2011-11-22 10:52:15
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10樓2011-11-22 17:32:17
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