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考研生涯金蟲 (正式寫手)
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[求助]
定點(diǎn)突變
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| 求設(shè)計(jì)大引物定點(diǎn)突變時(shí)的引物設(shè)計(jì)原則及一些注意事項(xiàng)。謝謝了！ |
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imyting
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2樓2011-11-26 17:07:33
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3樓2011-11-26 19:27:58
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4樓2011-11-26 23:15:55
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5樓2011-11-27 12:42:12
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【答案】應(yīng)助回帖
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wanhscn(金幣+6): 鼓勵(lì)新蟲友應(yīng)助回帖！很專業(yè)！ 2011-12-06 14:55:50
wanhscn(金幣+6): 鼓勵(lì)新蟲友應(yīng)助回帖！很專業(yè)！ 2011-12-06 14:55:50
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引物設(shè)計(jì)原則 1、引物應(yīng)用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)并具有特異性。 2、堿基要隨機(jī)分布。 3、引物長(zhǎng)度一般在15~30（17bp~25bp）堿基之間。 4、引物GC含量在40%~60%（45%~55%）之間，Tm值最好接近72℃ 5、引物3′端要避開密碼子的第3位 6、引物3′端不能選擇A，最好選擇T 7、擴(kuò)增產(chǎn)物的單鏈不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu) 8、引物自身不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ) 9、引物的5′端可以修飾，而3′端不可修飾 10、引物5′端和中間△G值應(yīng)該相對(duì)較高，而3′ 端△G值較低 11、引物具有特異性 12.堿基隨機(jī)分布，盡量均勻。 13.3端避開A/T、G/C rich區(qū)域。避免A/G、T/C連續(xù)結(jié)構(gòu)（2~3個(gè)） 14.在DNA測(cè)序和PCR中最好用5′末端穩(wěn)定(如GC含量較多)，而3′末端不太穩(wěn)定(如AT含量較多)的引物 15．引物與模板配對(duì)至少要20 bp，否則特異性低。 |
6樓2011-12-06 11:52:39
臨風(fēng)7071
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7樓2011-12-06 13:02:59
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